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zier1011

木虫 (著名写手)

[交流] PCR法检测微生物

问下下,通过PCR检测微生物16sRNA的方法,能不能检测到种呢?原理就是检测碱基含量吗?会不会有微生物的16sRNA的碱基含量相似,跑胶看不出来呢?
鄙人对这一块知道甚少,希望大家踊跃发言

看了大家的回复,追加如下问题:
诸位,谢谢大家的回复
鄙人并不是要确定所得菌株是否新种,而是想了解一下,通过鉴定16sRNA的碱基比例,能否检测微生物种的不同?
即使只能到属,也可以,关键是这种方法是否可行?这种原理有没有科学根据?

[ Last edited by zier1011 on 2009-11-10 at 15:06 ]
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花还香香的
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leonn

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
16SPCR扩增后可以直接去测序 然后在pubMed上序列比对一下 大概可以看出你的菌和一些已经测序的菌的相似性 可以鉴定到属内的水平 至于同一种菌的定论还要做其他的实验来确定 比如再做IGS(ITS) 可以鉴定到种的水平
6楼2009-11-08 21:37:27
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fykxy_206

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3,VIP+0):很详细 谢谢 11-5 19:47
PCR检测微生物的16S应该精确不到种,只能在属种,就是你检测的菌株大概是什么属。要精确到种的话还要做相应的生理生化实验。检测的原理不是你所说的检测碱基的含量,而是检测16SRNA的碱基的序列,就是你PCR后送去测序,结果在NCBI中的BLAST比对,从而确定是什么属。
2楼2009-11-05 16:43:44
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by fykxy_206 at 2009-11-5 16:43:
PCR检测微生物的16S应该精确不到种,只能在属种,就是你检测的菌株大概是什么属。要精确到种的话还要做相应的生理生化实验。检测的原理不是你所说的检测碱基的含量,而是检测16SRNA的碱基的序列,就是你PCR后送去 ...

有的文献上也说过当16SRNA相似程度大于98%时可以认为是同种。
3楼2009-11-05 23:29:14
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fykxy_206

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-11-5 23:29:

有的文献上也说过当16SRNA相似程度大于98%时可以认为是同种。

有吗?我们老师没有这样说,我们99%都不敢说是同种呢。
4楼2009-11-06 09:41:48
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