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PCR问题求助
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最近做PCR超级不顺，扩增细菌16S,连非特异带都没有，只有很亮的100bp左右的引物二聚体。 DNA模板以前用pfu扩得很好，但是最近换新买的taq酶了，没扩出来，做了退火温度梯度（50-60度）和mg+浓度梯度，都是只有引物二聚体。急问大家，酶的关系很大吗？也不至于连非特异带都没有吧？我的体系是20ul: 依次加入10×buffer :2ul dNTP (10mM) :0.4 ul 引物上 :0.4ul 引物下 :0.4ul 模板 :1ul taq(5U/ul) : 0.1 ul ddH2O :15.7ul 恳求虫子们帮忙分析分析。先谢谢了、、 另：有做土壤微生物的吗？，我的初提细菌DNA很深的颜色，褐色偏红，PCR也有问题，测了一下OD260,OD280,OD230，OD260/OD280只有1.4左右，而OD260/OD230只有1.0左右，我用氯仿抽提了好几次啊，怎么比值还这么低？不过发现OD260/OD280的水样DNA能扩出来，土壤的就是不行，大家知道大概什么数值范围合适吗？麻烦赐教。。 |
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fykxy_206
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4楼2009-11-05 16:36:23