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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 请教关于聚丙烯氨酰胺电泳的问题(非常紧急)

我现在做的是SDS-PAGE,但是出现了很多问题,想请教大家,
1. 分离胶中总是出现气泡,原来夏天做实验的时候没有出现这个问题,现在总是出现,想知道为什么
2. 胶凝的特别慢,看到有人说放到37摄氏度的培养箱中比较快,请问这样可以吗?
3. 还有最大的一个问题是我的胶总是凝了以后体积减少的特别多,本来梳子周围都铺满了胶,但是等到第二天胶总是体积减少很多很多,以至于梳子全部都露出来了
4. 我看到我这个分离胶中要添加6M的尿素,我想知道6M是个什么单位,什么意思啊?
期望各位高手多多给我指点,实在是感激不尽啊,在此先谢谢各位了,希望大家知无不言,言无不尽,谢啦!
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

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amisking(金币+5,VIP+0): 11-5 12:26
1. 气泡,你是指在胶凝固的过程中出现的气泡,还是配胶的时候有气泡?如果是凝固时出现气泡,可能试剂有问题。配胶的时候有气泡没多大关系吧,用水封口的时候,这些气泡一般都会跑上来...
2. 凝胶慢,放培养箱也可以,或者稍微多加一点TEMED。
3. 胶体积减小...现在你那儿是不是特别干燥?如果是的话,胶配好以后最好用电泳缓冲液泡着,放四度冰箱里,可以保存一周左右,基本不受季节影响。
4. 6M 就是 6 mol/L 啦。

[ Last edited by holyala on 2009-11-5 at 09:32 ]
2楼2009-11-05 09:29:06
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水过无恒

铜虫 (正式写手)

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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1.气泡多主要是因为板子没有洗干净,用SDS多洗几次吧。烘干再配胶

2. 胶凝的特别慢可能是APS(过硫酸铵)失效或者TMED时间放长失效,可以多加点TMED。放37度是可以加快凝胶

3.放一晚上了胶被体积减少很正常的,都慢慢被风干了啊。一般都是上层胶第二天才做的啊,晚上做了下层胶就用水封着过夜

4. 6Mol/ L啊,你难道跑小分子量的蛋白吗,如果不是加那玩意干嘛呢?
3楼2009-11-05 09:37:35
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firefly75

木虫 (著名写手)

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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡应该是操作问题哦,配置溶液时尽量避免剧烈搅动,灌胶时注意不要引入气泡,实在不行,可以先将溶液抽空气后再使用。
2. 放到37度可以的。
3. 是不是空气干燥导致失水太多,注意避免失水,在37度不要放置太长时间,胶凝后可用保鲜膜包裹后保存于4度。
4. 先汗下,6M=6mol/liter,用于蛋白变性。
4楼2009-11-05 09:47:39
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小小豆豆

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡可能有两个原因,第一,版没有处理干净;第二,操作问题,配置溶液时尽量避免剧烈搅动,灌胶时注意不要引入气泡,实在不行,可以先将溶液抽空气后再使用。
2. 放到37度可以的。
3. 是不是空气干燥导致失水太多,注意避免失水,在37度不要放置太长时间,胶凝后可用保鲜膜包裹后保存于4度。
4. 6M=6mol/L,用于蛋白变性。
5楼2009-11-05 09:58:08
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zyzlyl

银虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 11-5 12:26
“ 还有最大的一个问题是我的胶总是凝了以后体积减少的特别多,本来梳子周围都铺满了胶,但是等到第二天胶总是体积减少很多很多,以至于梳子全部都露出来了”
关于这个问题,可以在胶凝好以后,用浸泡过TBE的滤纸包裹梳子一端的胶,然后再用保鲜膜包好就可以了。
外面没有别人……
6楼2009-11-05 10:59:54
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖

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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡的原因可能有两个:第一,玻璃板没有处理干净;第二,操作问题。
2. 可以放到37度的培养箱中。
3. 很有可能是你配制胶的时候没有混匀,导致上面都是水,下面是胶,一定要混匀,我也遇到过这种情况。
4. 6M就是6mol/L。
7楼2009-11-05 12:14:41
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bioxixi

木虫 (著名写手)

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350784478(金币+2,VIP+0): 11-5 14:43
GOD
你问的问题真多  
我看大家回答的差不多了,我就补充一点儿吧,一、气泡是容易导出的,应该操作时轻柔一些避免产生气泡;二、天冷了,胶会凝的慢,放温箱会好,也可以适量增加AP和TEMD的量,AP要新鲜配制;三,放置过夜室温即可,不建议放4度,因为SDS低温会析出。四、天气干燥了,凝胶的水分也蒸发的快,即使保鲜膜罩上如果有缝隙作用也不大,可以不放过夜,当天用当天配也可以的。觉得配胶时可以加点甘油,个人意见。
8楼2009-11-05 12:48:12
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