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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教关于聚丙烯氨酰胺电泳的问题（非常紧急）
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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 请教关于聚丙烯氨酰胺电泳的问题（非常紧急）

我现在做的是SDS-PAGE，但是出现了很多问题，想请教大家，
1. 分离胶中总是出现气泡，原来夏天做实验的时候没有出现这个问题，现在总是出现，想知道为什么
2. 胶凝的特别慢，看到有人说放到37摄氏度的培养箱中比较快，请问这样可以吗？
3. 还有最大的一个问题是我的胶总是凝了以后体积减少的特别多，本来梳子周围都铺满了胶，但是等到第二天胶总是体积减少很多很多，以至于梳子全部都露出来了
4. 我看到我这个分离胶中要添加6M的尿素，我想知道6M是个什么单位，什么意思啊？
期望各位高手多多给我指点，实在是感激不尽啊，在此先谢谢各位了，希望大家知无不言，言无不尽，谢啦！
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1楼 2009-11-05 09:15:31
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+5,VIP+0): 11-5 12:26
1. 气泡，你是指在胶凝固的过程中出现的气泡，还是配胶的时候有气泡？如果是凝固时出现气泡，可能试剂有问题。配胶的时候有气泡没多大关系吧，用水封口的时候，这些气泡一般都会跑上来...
2. 凝胶慢，放培养箱也可以，或者稍微多加一点TEMED。
3. 胶体积减小...现在你那儿是不是特别干燥？如果是的话，胶配好以后最好用电泳缓冲液泡着，放四度冰箱里，可以保存一周左右，基本不受季节影响。
4. 6M 就是 6 mol/L 啦。

[ Last edited by holyala on 2009-11-5 at 09:32 ]
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2楼2009-11-05 09:29:06
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水过无恒

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1.气泡多主要是因为板子没有洗干净，用SDS多洗几次吧。烘干再配胶

2. 胶凝的特别慢可能是APS（过硫酸铵）失效或者TMED时间放长失效，可以多加点TMED。放37度是可以加快凝胶

3.放一晚上了胶被体积减少很正常的，都慢慢被风干了啊。一般都是上层胶第二天才做的啊，晚上做了下层胶就用水封着过夜

4. 6Mol/ L啊，你难道跑小分子量的蛋白吗，如果不是加那玩意干嘛呢？
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3楼2009-11-05 09:37:35
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firefly75

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡应该是操作问题哦，配置溶液时尽量避免剧烈搅动，灌胶时注意不要引入气泡，实在不行，可以先将溶液抽空气后再使用。
2. 放到37度可以的。
3. 是不是空气干燥导致失水太多，注意避免失水，在37度不要放置太长时间，胶凝后可用保鲜膜包裹后保存于4度。
4. 先汗下，6M＝6mol/liter，用于蛋白变性。
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4楼2009-11-05 09:47:39
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小小豆豆

金虫 (小有名气)
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡可能有两个原因，第一，版没有处理干净；第二，操作问题，配置溶液时尽量避免剧烈搅动，灌胶时注意不要引入气泡，实在不行，可以先将溶液抽空气后再使用。
2. 放到37度可以的。
3. 是不是空气干燥导致失水太多，注意避免失水，在37度不要放置太长时间，胶凝后可用保鲜膜包裹后保存于4度。
4. 6M＝6mol/L，用于蛋白变性。
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5楼2009-11-05 09:58:08
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zyzlyl

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+2,VIP+0): 11-5 12:26
“ 还有最大的一个问题是我的胶总是凝了以后体积减少的特别多，本来梳子周围都铺满了胶，但是等到第二天胶总是体积减少很多很多，以至于梳子全部都露出来了”
关于这个问题，可以在胶凝好以后，用浸泡过TBE的滤纸包裹梳子一端的胶，然后再用保鲜膜包好就可以了。
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外面没有别人……
6楼2009-11-05 10:59:54
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-5 12:26
1. 出现气泡的原因可能有两个：第一，玻璃板没有处理干净；第二，操作问题。
2. 可以放到37度的培养箱中。
3. 很有可能是你配制胶的时候没有混匀，导致上面都是水，下面是胶，一定要混匀，我也遇到过这种情况。
4. 6M就是6mol/L。
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7楼2009-11-05 12:14:41
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bioxixi

木虫 (著名写手)
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350784478(金币+2,VIP+0): 11-5 14:43
GOD
你问的问题真多  
我看大家回答的差不多了，我就补充一点儿吧，一、气泡是容易导出的，应该操作时轻柔一些避免产生气泡；二、天冷了，胶会凝的慢，放温箱会好，也可以适量增加AP和TEMD的量，AP要新鲜配制；三，放置过夜室温即可，不建议放4度，因为SDS低温会析出。四、天气干燥了，凝胶的水分也蒸发的快，即使保鲜膜罩上如果有缝隙作用也不大，可以不放过夜，当天用当天配也可以的。觉得配胶时可以加点甘油，个人意见。
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8楼2009-11-05 12:48:12
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