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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于pET抗性筛选问题
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yoyoyehan

[交流] 关于pET抗性筛选问题

最近在构建载体，pET和目的片段双酶切后连接，转入DH5α，涂培养基，就是不长菌落，做了好几次，都不长，
  我的培养基里加的Amp，难道是这里出问题了？pET是抗KaNa的，我是不该加KaNa？请虫友们指教，
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1楼 2009-11-03 18:25:05
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wmjiang

银虫 (小有名气)
★
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当然加Km啊，这是常识。你是学生物的吗？
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2楼2009-11-03 18:39:11
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konggy

银虫 (正式写手)
★
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要看是PET的哪种载体，有kana抗性，也有Amp抗性的
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3楼2009-11-03 19:02:07
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖
★
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因为PET载体是抗Kana的，当然应该加Kana，加Amp菌但让不会长了，都被杀死了
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4楼2009-11-03 19:46:31
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
建议楼主去恶补生物基本知识，抗什么都不知道，就更不用问你它是怎么抗的了，就是抗性机理，多看看书吧
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-11-03 21:07:51
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
原因比较复杂~~~
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小木虫之有关部门负责人
6楼2009-11-03 21:08:08
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大姗

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要看你是PET系列的哪个载体呀   比如pet20抗Amp  而pet28抗Kan哦   还有好多   要查下图谱
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7楼2009-11-04 09:47:03
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rkrl001

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看看你所用pET的载体图谱，具有什么抗性就添加相应的抗生素！
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8楼2009-11-04 12:49:29
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你用载体连图谱都没有看过？
pET有的是氨苄抗性有的是卡那抗性

我觉得首要问题是你要搞清楚你用的是哪个载体？你不看看图谱怎么做后续实验呢
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9楼2009-11-04 13:14:06
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njlf1258

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你没有说具体是pEt那种载体！另外不长菌也可能说明你的连接有问题，或者你的感受态细胞有问题。而且你在作转化时应该再做个阳性对照，才能更好地说明问题！
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10楼2009-11-04 14:00:44
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