24小时热门版块排行榜    

查看: 1134  |  回复: 10
当前主题已经存档。

yoyoyehan

[交流] 关于pET抗性筛选问题

最近在构建载体,pET和目的片段双酶切后连接,转入DH5α,涂培养基,就是不长菌落,做了好几次,都不长,
  我的培养基里加的Amp,难道是这里出问题了?pET是抗KaNa的,我是不该加KaNa?请虫友们指教,
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmjiang

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
当然加Km啊,这是常识。你是学生物的吗?
2楼2009-11-03 18:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

konggy

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要看是PET的哪种载体,有kana抗性,也有Amp抗性的
3楼2009-11-03 19:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
因为PET载体是抗Kana的,当然应该加Kana,加Amp菌但让不会长了,都被杀死了
4楼2009-11-03 19:46:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

建议楼主去恶补生物基本知识,抗什么都不知道,就更不用问你它是怎么抗的了,就是抗性机理,多看看书吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-11-03 21:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

原因比较复杂~~~
小木虫之有关部门负责人
6楼2009-11-03 21:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大姗

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要看你是PET系列的哪个载体呀   比如pet20抗Amp  而pet28抗Kan哦   还有好多   要查下图谱
7楼2009-11-04 09:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rkrl001

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看你所用pET的载体图谱,具有什么抗性就添加相应的抗生素!
8楼2009-11-04 12:49:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用载体连图谱都没有看过?
pET有的是氨苄抗性有的是卡那抗性

我觉得首要问题是你要搞清楚你用的是哪个载体?你不看看图谱怎么做后续实验呢
9楼2009-11-04 13:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你没有说具体是pEt那种载体!另外不长菌也可能说明你的连接有问题,或者你的感受态细胞有问题。而且你在作转化时应该再做个阳性对照,才能更好地说明问题!
10楼2009-11-04 14:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yoyoyehan 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +36 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 38/1900 2026-08-13 23:15 by 633CJY576Q1h
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见