24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1047  |  回复: 10
当前主题已经存档。

yoyoyehan

[交流] 关于pET抗性筛选问题

最近在构建载体,pET和目的片段双酶切后连接,转入DH5α,涂培养基,就是不长菌落,做了好几次,都不长,
  我的培养基里加的Amp,难道是这里出问题了?pET是抗KaNa的,我是不该加KaNa?请虫友们指教,
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmjiang

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
当然加Km啊,这是常识。你是学生物的吗?
2楼2009-11-03 18:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

konggy

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要看是PET的哪种载体,有kana抗性,也有Amp抗性的
3楼2009-11-03 19:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
因为PET载体是抗Kana的,当然应该加Kana,加Amp菌但让不会长了,都被杀死了
4楼2009-11-03 19:46:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

建议楼主去恶补生物基本知识,抗什么都不知道,就更不用问你它是怎么抗的了,就是抗性机理,多看看书吧
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-11-03 21:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

原因比较复杂~~~
小木虫之有关部门负责人
6楼2009-11-03 21:08:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大姗

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要看你是PET系列的哪个载体呀   比如pet20抗Amp  而pet28抗Kan哦   还有好多   要查下图谱
7楼2009-11-04 09:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rkrl001

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看你所用pET的载体图谱,具有什么抗性就添加相应的抗生素!
8楼2009-11-04 12:49:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你用载体连图谱都没有看过?
pET有的是氨苄抗性有的是卡那抗性

我觉得首要问题是你要搞清楚你用的是哪个载体?你不看看图谱怎么做后续实验呢
9楼2009-11-04 13:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

njlf1258


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你没有说具体是pEt那种载体!另外不长菌也可能说明你的连接有问题,或者你的感受态细胞有问题。而且你在作转化时应该再做个阳性对照,才能更好地说明问题!
10楼2009-11-04 14:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yoyoyehan 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路! +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 7/350 2026-05-23 16:57 by articlefan
[基金申请] 揭秘青基评审内幕:几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助,期刊 +4 希冀,有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀,有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 6/300 2026-05-21 01:37 by 17520222914
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
请填处理意见