| 查看: 990 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
zhouzhou_3006木虫 (著名写手)
|
[交流]
同源重组的几个问题
|
||
|
基因敲除中遇到的问题： 1）转化了PKD46的大肠杆菌，制作感受态细胞，感受态方法：先在30°C，200 rpm培养过夜，以1%的比率接入新的LB培养基中，加入10 mM的L-阿拉伯糖（从生工买的BBI公司的，纯度为98%-101%）培养6 h左右，OD600为大概为0.5-1.0； 2）PCR产物：没有经过胶回收或者乙醇沉淀。因为之前敲过一个基因，当时胶回收后离子强度太大，电转时经常击穿，所以就直接用PCR片段进行电转，已经成功敲除了两个基因； 这次按照以前的方法做了一个月了，总是没有菌长出，要不就染菌，染的菌在显微镜下和大肠杆菌几乎没有区别，可是菌落形态有点像枯草芽孢杆菌一类的，气味比大肠杆菌还要难闻； 不知道是感受态的问题还是PCR产物的问题，问题很多，一一排除需要很多时间和精力，有没有内行的人帮忙分析一下，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域
已经有70人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有30人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有15人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有12人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有11人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有10人回复
-
阿姨
已经有4人回复
-
一作与独作在应聘高校教师时区别大吗
已经有4人回复
-
静等基金结果
已经有21人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有28人回复
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16806.1
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 2033
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2009-11-01 21:25:31
kitty8682
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 499.9
- 散金: 1050
- 帖子: 484
- 在线: 38.2小时
- 虫号: 609701
- 注册: 2008-09-22
- 专业: 能源化工
3楼2009-11-01 21:58:49
9528
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13139.5
- 散金: 1201
- 红花: 20
- 沙发: 1
- 帖子: 3658
- 在线: 427小时
- 虫号: 117447
- 注册: 2005-11-26
- 专业: 天文技术和方法
4楼2009-11-01 22:15:40
