| 查看: 968 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
zhouzhou_3006木虫 (著名写手)
|
[交流]
同源重组的几个问题
|
||
|
基因敲除中遇到的问题： 1）转化了PKD46的大肠杆菌，制作感受态细胞，感受态方法：先在30°C，200 rpm培养过夜，以1%的比率接入新的LB培养基中，加入10 mM的L-阿拉伯糖（从生工买的BBI公司的，纯度为98%-101%）培养6 h左右，OD600为大概为0.5-1.0； 2）PCR产物：没有经过胶回收或者乙醇沉淀。因为之前敲过一个基因，当时胶回收后离子强度太大，电转时经常击穿，所以就直接用PCR片段进行电转，已经成功敲除了两个基因； 这次按照以前的方法做了一个月了，总是没有菌长出，要不就染菌，染的菌在显微镜下和大肠杆菌几乎没有区别，可是菌落形态有点像枯草芽孢杆菌一类的，气味比大肠杆菌还要难闻； 不知道是感受态的问题还是PCR产物的问题，问题很多，一一排除需要很多时间和精力，有没有内行的人帮忙分析一下，谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
河北省自然科学基金
已经有8人回复
-
西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题
已经有5人回复
-
论文撤稿了
已经有5人回复
-
某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！
已经有5人回复
-
26/27申博自荐
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标
已经有4人回复
-
青B发送上会通知了吗
已经有7人回复
-
博士申请
已经有3人回复
zhuifeng7000
至尊木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 16320
- 散金: 32
- 红花: 3
- 帖子: 1955
- 在线: 87.7小时
- 虫号: 598143
- 注册: 2008-09-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2009-11-01 21:25:31
kitty8682
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 499.9
- 散金: 1050
- 帖子: 484
- 在线: 38.2小时
- 虫号: 609701
- 注册: 2008-09-22
- 专业: 能源化工
3楼2009-11-01 21:58:49
9528
至尊木虫 (职业作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 13139.5
- 散金: 1201
- 红花: 20
- 沙发: 1
- 帖子: 3658
- 在线: 426.9小时
- 虫号: 117447
- 注册: 2005-11-26
- 专业: 天文技术和方法
4楼2009-11-01 22:15:40
10