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新虫 (初入文坛)

[求助] 镍柱蛋白纯化求助

我是用BL21表达了植物中的一个蛋白，过完镍柱后有一些杂蛋白，目前有个问题是我过夜孵育后用10、20mM咪唑去洗，很容易把目的蛋白洗下来，导致后面洗脱的时候目的蛋白几乎没有了，想请教一下各位大佬，有什么方法可以避免目的蛋白被大量洗涤下来。

发自小木虫手机客户端

1楼 2024-12-11 15:40:18

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专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

你说的“过完镍柱后有一些杂蛋白”和“过夜孵育后用10、20mM咪唑去洗，很容易把目的蛋白洗下来”矛盾，如果是后者，那就是不能“过镍柱”，更别说“过完镍柱”了。

流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

3楼2025-01-04 22:48:52

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金虫 (知名作家)

前面的咪唑浓度可以再低一点，可以拉线性梯度确定那个浓度不会洗脱下来，哪个会把你的目标蛋白一下来，梯度区间小才能更纯，另外考虑变换不同的pH和离子强度，不要只考虑单因素

2楼2024-12-11 15:46:26

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