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[求助]
求助一个构建CHO稳转细胞系的问题
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| 用的CHO-S细胞系，使用piggybac转座子想要导入一个目的基因构建稳转细胞系，按照文章中的方法进行实验，两种质粒质量比donor : helper=9 : 1，转染使用了PEI和脂质体的化转法，48h后更换培养基为含有10 μg/mL嘌呤霉素的培养基筛选。目前问题是筛选过程中前两天细胞还算正常，第三天或者第四天时细胞会出现大批量死亡，基本最后就没有幸存的了。另外这个质粒上有带GFP，转染完成后观察GFP荧光强度还是比较好的，随着筛选逐渐绿色的细胞越来越少了，求助一下怎么办，哪里可能出了问题，转染阳性率太低。 |
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