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汕头大学海洋科学接受调剂
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准博士

金虫 (正式写手)

[交流] 简并引物设计失败,找原因中

上周根据同属菌种的同一酶基因的保守序列,设计了简并引物,正向反向均为6个氨基酸,文献中也是这么设计就克隆了目的片段,而我用同样的方法,克隆的目的片段却不行,理论上应当是670bp左右,而我只克隆出来524bp,在NCBI中blast,跟另一个酶相似性挺高,却不是我的那个酶。其实当时PCR出来的结果,我就觉得有些不对劲。
    唉,这简并引物到底怎么弄啊?真的这么难吗?有谁可以帮帮我啊?
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c3024034

银虫 (正式写手)

帮楼主顶起 一起学习
5楼2009-11-02 11:28:04
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
准博士(金币+2,VIP+0):xiexie 11-2 10:54
可能是因为参考的序列不够多,引物相关性不好。
Thank-you,so-blue.
2楼2009-10-29 10:58:00
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陈思容

铜虫 (正式写手)

★ ★
准博士(金币+2,VIP+0):xiexie 11-2 10:54
是不是模板的问题?
3楼2009-10-29 14:23:15
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

★ ★
准博士(金币+2,VIP+0):xiexie 11-2 10:55
首先查找多个菌种的同一酶基因的保守序列,然后设计了简并引物
但愿人长久
4楼2009-11-02 08:57:55
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