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我好像傻了

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增问题 已有2人参与

根据实验要求,自己随机设计的模板序列,比较短,40nt,去年一直都能跑出来标准曲线,但是今年跑的效果一直都不好,PCR孔终浓度10fm,1fm以及背景都集中在24-25左右,已经排除了试剂污染,气溶胶污染,真的要崩溃了,实在找不到原因了,请路过的大神帮帮忙。

如果实在不行,换个思路,有哪位大佬有关于40-50的扩增效果比较好的模板序的也行

跪求
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种设计好引物序列,然后拿到外面质粒构建吧,一般不会有太大的问题。你可以重新测一下载体有可能是载体突变了。
4楼2025-01-26 09:58:45
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这个明显是原料问题
核酸提取与Taqman诊断
2楼2024-11-28 11:39:15
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shuaibia6 at 2025-01-26 09:58:45
这种设计好引物序列,然后拿到外面质粒构建吧,一般不会有太大的问题。你可以重新测一下载体有可能是载体突变了。

写完了修改不了。这种都是自己设计好序列,拿到外面生物公司,他们都会给你设计引物,全基因合成构建表达载体,很成熟的体系了。有什么问题,你直接找他们呗,让他们用通用引物测一下。
5楼2025-01-26 10:05:07
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