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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增问题
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我好像傻了

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增问题 已有2人参与

根据实验要求，自己随机设计的模板序列，比较短，40nt，去年一直都能跑出来标准曲线，但是今年跑的效果一直都不好，PCR孔终浓度10fm，1fm以及背景都集中在24-25左右，已经排除了试剂污染，气溶胶污染，真的要崩溃了，实在找不到原因了，请路过的大神帮帮忙。

如果实在不行，换个思路，有哪位大佬有关于40-50的扩增效果比较好的模板序的也行

跪求
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1楼 2024-11-13 10:42:12
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这个明显是原料问题
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核酸提取与Taqman诊断
2楼2024-11-28 11:39:15
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Andy_124

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2024-12-04 17:29:15
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种设计好引物序列，然后拿到外面质粒构建吧，一般不会有太大的问题。你可以重新测一下载体有可能是载体突变了。
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4楼2025-01-26 09:58:45
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shuaibia6 at 2025-01-26 09:58:45
这种设计好引物序列，然后拿到外面质粒构建吧，一般不会有太大的问题。你可以重新测一下载体有可能是载体突变了。

写完了修改不了。这种都是自己设计好序列，拿到外面生物公司，他们都会给你设计引物，全基因合成构建表达载体，很成熟的体系了。有什么问题，你直接找他们呗，让他们用通用引物测一下。
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5楼2025-01-26 10:05:07
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