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枯草芽孢杆菌异源表达胰蛋白酶酶活问题 已有1人参与
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大家好，想向大家请教一个问题。 鄙人的问题是这样的： 我以枯草芽孢杆菌专用的质粒pwb980为载体，构建了用以表达链霉菌胰蛋白酶的重组质粒，并将其转化至枯草芽孢杆菌SCK6中，后续的转化子测序鉴定结果显示我的重组质粒转化成功。紧接着我将该重组菌株扩培发酵产酶并测定酶活，结果显示有酶活。但是我第二次接种相同的甘油管菌株发酵产酶，但是却无酶活。不知道问题出在哪里。 我细细观察了一下，发酵产酶时的培养液是偏白的，发酵不产酶时的培养液是偏黄绿色的，不知道为什么会有这种差异情况出现，按理说接种的是同一支甘油管菌里的原始菌株，且培养基配方是相同的。 后续我也使用载体的通用引物进行了PCR鉴定，结果显示我的目的条带存在，质粒也未丢失。同时我也重新进行了质粒的重组转化，测序结果也正确，但是发酵产酶也依旧无酶活。但是我第一次转化时的确显示重组菌株产酶，且具有较高的酶活。 希望大佬们能指点一下迷津，鄙人感激不尽，金币也奉上。 |
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