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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 还是双酶切的问题
汕头大学海洋科学、生物学、生物与医药接受调剂
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yoyoyehan

[交流] 还是双酶切的问题

做原核表达，利用含有酶切位点的引物已经扩增出目的条带，但是双酶切后电泳怎么没有条带呢？酶切 37度，6小时，请大家帮忙分析分析怎么回事？
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1楼 2009-10-28 17:50:53
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message

铁虫 (初入文坛)
★
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会不会是酶切时间太长弥散了，一般我都切3小时，还是你上样量太小。
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2楼2009-10-28 18:30:16
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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6小时是不是太长了点啊，我一般切45min，用的是NEB的酶
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-28 18:47:30
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yjhorn

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
确定引物扩增出目的片段？
电永的目的片段量够？
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认识大家是缘分啊！
4楼2009-10-28 19:13:51
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该是时间太长了吧，出现星号活性，或者被切散了
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5楼2009-10-28 19:43:09
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foreverru

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们那时学习生物化学，分子生物学，细胞生物学时都是45分钟就ok了，我觉得时间长短要按照底物浓度定的大小而定的。
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6楼2009-10-29 11:26:07
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caike6326

铁虫 (初入文坛)
★
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你的PCR产物纯化了吗？纯化后有没有检测？会不会纯化完了就已经丢失。。。
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7楼2009-10-29 15:25:04
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陈思容

铜虫 (正式写手)
★
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确定你的酶不会切断目的条带，
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8楼2009-10-29 17:08:42
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
★
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最大的可能是污染了DNA内切酶，我也遇到过
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帮助虫友，提升自己
9楼2009-10-29 18:54:14
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crab1983

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们实验室一般做酶切都一个小时左右  你可以在酶切的时候设置对照  
一般切不开的也会有一条带  不知道你这个为什么没有带
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10楼2009-10-30 17:18:32
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