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yoyoyehan

[交流] 还是双酶切的问题

做原核表达,利用含有酶切位点的引物已经扩增出目的条带,但是双酶切后电泳怎么没有条带呢?酶切 37度,6小时,请大家帮忙分析分析怎么回事?
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message

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
会不会是酶切时间太长弥散了,一般我都切3小时,还是你上样量太小。
2楼2009-10-28 18:30:16
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
6小时是不是太长了点啊,我一般切45min,用的是NEB的酶
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-28 18:47:30
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yjhorn

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
确定引物扩增出目的片段?
电永的目的片段量够?
认识大家是缘分啊!
4楼2009-10-28 19:13:51
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yuanfeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
应该是时间太长了吧,出现星号活性,或者被切散了
5楼2009-10-28 19:43:09
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foreverru

新虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们那时学习生物化学,分子生物学,细胞生物学时都是45分钟就ok了,我觉得时间长短要按照底物浓度定的大小而定的。
6楼2009-10-29 11:26:07
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caike6326

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你的PCR产物纯化了吗?纯化后有没有检测?会不会纯化完了就已经丢失。。。
7楼2009-10-29 15:25:04
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陈思容

铜虫 (正式写手)


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确定你的酶不会切断目的条带,
8楼2009-10-29 17:08:42
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最大的可能是污染了DNA内切酶,我也遇到过
帮助虫友,提升自己
9楼2009-10-29 18:54:14
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crab1983

铜虫 (小有名气)


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我们实验室一般做酶切都一个小时左右  你可以在酶切的时候设置对照  
一般切不开的也会有一条带  不知道你这个为什么没有带
10楼2009-10-30 17:18:32
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