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yoyoyehan

[交流] 原核表达的问题 急求

原核表达时  可以将载体PET和目的片段连接后   直接转入DE3诱导表达么？  看到一个博士论文上是这么写的，但是pET手册上面说 载体和目的片段连接后要先转入非表达载体  测序，然后再转入表达载体中诱导表达，这和论文中的有些不一样，请各位虫友帮忙解释一下，谢谢。
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1楼 2009-10-26 22:38:01
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tracy007

木虫 (正式写手)
先进行测序是先鉴定一下基因序列是否正确，这样比较保险吧
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5楼2009-10-27 10:54:02
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
手册更准确
直接也没什么，效率问题
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2楼2009-10-26 22:50:21
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-27 08:18
引用回帖:
Originally posted by yoyoyehan at 2009-10-26 22:38:
原核表达时  可以将载体PET和目的片段连接后   直接转入DE3诱导表达么？  看到一个博士论文上是这么写的，但是pET手册上面说 载体和目的片段连接后要先转入非表达载体  测序，然后再转入表达载体中诱导表达，这和 ...

恩，是的。要先转入非表达载体测序，然后再转入表达载体中诱导表达。因为
如果不测序，将载体PET和目的片段连接后，直接转入DE3诱导表达，如果表到了还好，但是如果不表达，可能的原因就多了。可能是P出的目的基因条带突变了，可能连接反了（单酶切的话），可能是诱导的问题，可能...所以要一步一步验证，每一步都保证是正确的，这才是正确的试验思路。
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3楼2009-10-27 00:12:15
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
因为要先测序才知道融合载体构建是否成功，尤其是如果你的目的片段扩增有误，正好影响了读码框就麻烦了 所以先测序，用测序正确的质粒表达比较可靠哦
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4楼2009-10-27 09:08:52
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