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yoyoyehan

[交流] 原核表达的问题 急求

原核表达时  可以将载体PET和目的片段连接后   直接转入DE3诱导表达么?  看到一个博士论文上是这么写的,但是pET手册上面说 载体和目的片段连接后要先转入非表达载体  测序,然后再转入表达载体中诱导表达,这和论文中的有些不一样,请各位虫友帮忙解释一下,谢谢。
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bioxixi

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
因为要先测序才知道融合载体构建是否成功,尤其是如果你的目的片段扩增有误,正好影响了读码框就麻烦了 所以先测序,用测序正确的质粒表达比较可靠哦
4楼2009-10-27 09:08:52
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
手册更准确
直接也没什么,效率问题
2楼2009-10-26 22:50:21
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-27 08:18
引用回帖:
Originally posted by yoyoyehan at 2009-10-26 22:38:
原核表达时  可以将载体PET和目的片段连接后   直接转入DE3诱导表达么?  看到一个博士论文上是这么写的,但是pET手册上面说 载体和目的片段连接后要先转入非表达载体  测序,然后再转入表达载体中诱导表达,这和 ...

恩,是的。要先转入非表达载体测序,然后再转入表达载体中诱导表达。因为
如果不测序,将载体PET和目的片段连接后,直接转入DE3诱导表达,如果表到了还好,但是如果不表达,可能的原因就多了。可能是P出的目的基因条带突变了,可能连接反了(单酶切的话),可能是诱导的问题,可能...所以要一步一步验证,每一步都保证是正确的,这才是正确的试验思路。
3楼2009-10-27 00:12:15
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tracy007

木虫 (正式写手)

先进行测序是先鉴定一下基因序列是否正确,这样比较保险吧
5楼2009-10-27 10:54:02
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