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yoyoyehan

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[交流] 原核表达的问题急求

原核表达时可以将载体PET和目的片段连接后直接转入DE3诱导表达么？看到一个博士论文上是这么写的，但是pET手册上面说载体和目的片段连接后要先转入非表达载体测序，然后再转入表达载体中诱导表达，这和论文中的有些不一样，请各位虫友帮忙解释一下，谢谢。

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1楼 2009-10-26 22:38:01

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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by yoyoyehan at 2009-10-26 22:38:
原核表达时可以将载体PET和目的片段连接后直接转入DE3诱导表达么？看到一个博士论文上是这么写的，但是pET手册上面说载体和目的片段连接后要先转入非表达载体测序，然后再转入表达载体中诱导表达，这和 ...

恩，是的。要先转入非表达载体测序，然后再转入表达载体中诱导表达。因为
如果不测序，将载体PET和目的片段连接后，直接转入DE3诱导表达，如果表到了还好，但是如果不表达，可能的原因就多了。可能是P出的目的基因条带突变了，可能连接反了（单酶切的话），可能是诱导的问题，可能...所以要一步一步验证，每一步都保证是正确的，这才是正确的试验思路。