24小时热门版块排行榜    

查看: 742  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shell_ya

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助;双酶切切不出来

我用BamH1和Xhol1对质粒进行双酶切,用10微升体系切不到条带,加大为100微升体系的时候切到三条带。理应至切到两条带的,且三条带中也没有我要的目的条带。请教各位帮忙指导一下,谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-10-26 at 22:12 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckyyan

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by tracy007 at 2009-10-27 10:51:
是不是buffer的pH不适合呢

上次NEB技术总监的产品介绍会上,她说:NEB好多酶5min。就可以完成酶切。可以酶切半小时左右。切得时间过长会有非特异条带出现。所谓没的星号活性。可以看看你所用酶的说明书。
9楼2009-10-27 20:12:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

有图吗?什么质粒?
2楼2009-10-26 22:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lywinan

捐助贵宾 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-27 08:18
1、个人感觉10微升的体系较小,酶的用量不要超过总体积的十分之一;而100微升的体系较大,如果切胶回收,我一般使用20微升的体系,可以切两个相同的体系,而后回收时过一个柱子;
2、设计双酶切时,要看目的片断中不要有酶切位点;
3、酶切前对质粒的质量进行控制,可以跑个质粒样品或在其他位点进行酶切验证,看是否是目的质粒
就想到这些
3楼2009-10-26 22:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘一笑

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
切的时间控制,双酶切不行就先后单切,你的酶切图谱一定仔细看分析一下,
真实的活着,真实的追求,真实的享受,每一天的存在感
4楼2009-10-26 23:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +4 jiajunX 2026-03-22 4/200 2026-03-23 14:21 by xiaotangjing
[考研] 工科0856求调剂 +4 沐析汀汀 2026-03-21 4/200 2026-03-23 13:08 by 醉在风里
[考研] 284求调剂 +6 Zhao anqi 2026-03-22 6/300 2026-03-23 09:23 by king123!
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 310求调剂 +4 baibai1314 2026-03-16 4/200 2026-03-22 20:19 by edmund7
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 求调剂 +6 十三加油 2026-03-21 6/300 2026-03-22 17:00 by i_cooler
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
请填处理意见