24小时热门版块排行榜    

查看: 741  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

shell_ya

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助;双酶切切不出来

我用BamH1和Xhol1对质粒进行双酶切,用10微升体系切不到条带,加大为100微升体系的时候切到三条带。理应至切到两条带的,且三条带中也没有我要的目的条带。请教各位帮忙指导一下,谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-10-26 at 22:12 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘一笑

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
切的时间控制,双酶切不行就先后单切,你的酶切图谱一定仔细看分析一下,
真实的活着,真实的追求,真实的享受,每一天的存在感
4楼2009-10-26 23:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

有图吗?什么质粒?
2楼2009-10-26 22:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lywinan

捐助贵宾 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-27 08:18
1、个人感觉10微升的体系较小,酶的用量不要超过总体积的十分之一;而100微升的体系较大,如果切胶回收,我一般使用20微升的体系,可以切两个相同的体系,而后回收时过一个柱子;
2、设计双酶切时,要看目的片断中不要有酶切位点;
3、酶切前对质粒的质量进行控制,可以跑个质粒样品或在其他位点进行酶切验证,看是否是目的质粒
就想到这些
3楼2009-10-26 22:58:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by shell_ya at 2009-10-26 21:53:
我用BamH1和Xhol1对质粒进行双酶切,用10微升体系切不到条带,加大为100微升体系的时候切到三条带。理应至切到两条带的,且三条带中也没有我要的目的条带。请教各位帮忙指导一下,谢谢!

[ Last edited by am ...

先好好分析下质粒的图谱,看看这两个酶切位点到底有多少个。其实验证的话10ul的体系也就够了。如果你的质粒正确的话你可能少分析到了一个酶切位点。
5楼2009-10-27 00:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +6 纸鱼ly 2026-03-21 6/300 2026-03-23 12:08 by Iveryant
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 梁梁校校 2026-03-17 9/450 2026-03-21 02:17 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
请填处理意见