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shell_ya

铁虫 (初入文坛)

[交流] 求助;双酶切切不出来

我用BamH1和Xhol1对质粒进行双酶切,用10微升体系切不到条带,加大为100微升体系的时候切到三条带。理应至切到两条带的,且三条带中也没有我要的目的条带。请教各位帮忙指导一下,谢谢!

[ Last edited by amisking on 2009-10-26 at 22:12 ]
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by shell_ya at 2009-10-26 21:53:
我用BamH1和Xhol1对质粒进行双酶切,用10微升体系切不到条带,加大为100微升体系的时候切到三条带。理应至切到两条带的,且三条带中也没有我要的目的条带。请教各位帮忙指导一下,谢谢!

[ Last edited by am ...

先好好分析下质粒的图谱,看看这两个酶切位点到底有多少个。其实验证的话10ul的体系也就够了。如果你的质粒正确的话你可能少分析到了一个酶切位点。
5楼2009-10-27 00:07:54
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

有图吗?什么质粒?
2楼2009-10-26 22:51:04
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lywinan

捐助贵宾 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-27 08:18
1、个人感觉10微升的体系较小,酶的用量不要超过总体积的十分之一;而100微升的体系较大,如果切胶回收,我一般使用20微升的体系,可以切两个相同的体系,而后回收时过一个柱子;
2、设计双酶切时,要看目的片断中不要有酶切位点;
3、酶切前对质粒的质量进行控制,可以跑个质粒样品或在其他位点进行酶切验证,看是否是目的质粒
就想到这些
3楼2009-10-26 22:58:15
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刘一笑

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
切的时间控制,双酶切不行就先后单切,你的酶切图谱一定仔细看分析一下,
真实的活着,真实的追求,真实的享受,每一天的存在感
4楼2009-10-26 23:08:27
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