| 查看: 1215 | 回复: 11 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
seeker91
|
[交流]
构建新质粒载体
|
||
|
基于蓝白斑筛选载体PUC57构建一种新的载体，此载体在LacZ的下游融合进一个致死基因CCDB，此基因在大肠杆菌内表达后会产生CCDB蛋白，此蛋白能灭活DNA旋转酶，从而导致宿主的死亡，因此，凡是有外源基因插入的载体宿主存活，没有外源基因片段插入的载体宿主死亡，即只要宿主存活，就说明载体连入了外源基因，简化了蓝白斑筛选。 本人从文献上得知这一原理，也进行过实验，但实验结果令人百思不得其解，发现存活的个体也有未插入片段的载体，或者载体本身在转换过程中被破坏。现请教广大虫友，不吝赐教，出谋划策，援手相助！ |
回复此楼» 猜你喜欢
271求调剂
已经有12人回复
-
322求调剂
已经有3人回复
-
环境工程 085701，267求调剂
已经有15人回复
-
材料0856 英一数二 323 求调剂
已经有3人回复
-
301求调剂
已经有3人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
350求调剂
已经有3人回复
-
309分085801求调剂
已经有7人回复
-
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）
已经有3人回复
-
求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过
已经有3人回复
zier1011
管理员
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3224.2
- 散金: 295
- 红花: 11
- 帖子: 1230
- 在线: 268.4小时
- 虫号: 796939
- 注册: 2009-06-19
- 性别: MM
- 专业: 微生物
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-26 19:09
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-26 19:09
|
1.致死基因连进去后，重组质粒转化大肠杆菌怎么生长？他不是让宿主致死了吗？ 2.如果你是提取空的质粒后，先连接了CCDB，然后有连接了其他的目的片段，最后再做转化，你怎么就能保证你的CCBD就一定正确连接了呢？难道要把两段基因都连接之后测序？ 3.如果你只是看了连接后的片段长度，那并不能说明CCBD连接进去就一定有活性的，我们平常在做克隆表达时，不是很多时候都没有活性的吗，要挑很多转化子，才有可能找到有表达的重组子，而且未必有活性！ 4.因此说，凭什么说连接进去的CCBD就一定能表达并且有活性呢？ 5.或者有其他的方法保证连接正确和表达成功并肯定有活性？等回答 |
4楼2009-10-26 15:07:42
susizheng
管理员
我們是糖 甜到憂傷
- BioEPI: 8
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
2楼2009-10-26 12:50:40
seeker91 
专家顾问
- 应助: 140 (高中生)
- 金币: 4.2
- 散金: 2695
- 红花: 28
- 沙发: 1
- 帖子: 17566
- 在线: 312.1小时
- 虫号: 532042
- 注册: 2008-03-24
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
3楼2009-10-26 13:11:32
gyesang
无虫
-
专家经验: +24 - BioEPI: 1
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
5楼2009-10-26 16:56:23
