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[求助]
overlap PCR求助
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我想把A,B两个基因通过overlap pcr方法连在一起，A引物是F1/R1，B引物是F2/R2，且两片段之间有33 bp的同源臂。AB都扩增出来回收，现在用overlap PCR出现了非特异型扩增，一开始先不加引物，其他正常加，进行18个循环，退火温度55℃，待温度下降，再加上引物进行33个循环。primer用的还是原来的，一个片段的上游引物，一个片段的下游引物，延伸时间增加了一倍，有许多非特异条带，还有比目的条带还要大的，有大佬指点一下嘛，各位有好一点的建议？不胜感激，谢谢。 发自小木虫Android客户端 |
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