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a85202

金虫 (小有名气)

[交流] 菌落PCR验证问题 已有1人参与

各位虫友好,最近菌落PCR验证遇到了奇怪的问题:

      我在铜绿假单胞菌中电转pherd20T质粒,直接从转化板上挑选单菌落,是可以验证出质粒的条带的,很清晰,这为第一次验证。
为了进一步验证,我将第一次验证对的单菌落,再次通过加有抗生素的摇菌管进行扩大,之后再取菌液作为模板对电转的质粒进行PCR验证,发现没有扩出质粒中对应的条带,阴性对照和阳性对照没有问题。
按理说,如果第一次是假阳性,那么扩大培养应该不长,现在是PCR验证不出质粒条带,但是菌株又能够在抗生素的培养基中正常生长,这是什么情况?
不知道大家有没有遇到类似的问题。

其他质粒也出现过这种情况,很是费解。
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a85202

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2024-07-25 14:45:30
有没有可能质粒直接倒在平台上了,没有转入菌中,扩增的不是菌里的质粒,而是菌旁的?

存在在这种可能,所以我对第一次验证对的菌落进行扩大后再次验证。

如果是没有转入菌体内,那么在进行扩大培养时,菌体应该不长,因为没有质粒的抗性,但是,我进行扩大培养时,菌体长起来了,说明是具有抗性的,但是PCR却验不出来。
3楼2024-07-25 16:23:33
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有没有可能质粒直接倒在平台上了,没有转入菌中,扩增的不是菌里的质粒,而是菌旁的?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2024-07-25 14:45:30
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