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a85202

金虫 (小有名气)

[交流] 菌落PCR验证问题 已有1人参与

各位虫友好，最近菌落PCR验证遇到了奇怪的问题：

      我在铜绿假单胞菌中电转pherd20T质粒，直接从转化板上挑选单菌落，是可以验证出质粒的条带的，很清晰，这为第一次验证。
为了进一步验证，我将第一次验证对的单菌落，再次通过加有抗生素的摇菌管进行扩大，之后再取菌液作为模板对电转的质粒进行PCR验证，发现没有扩出质粒中对应的条带，阴性对照和阳性对照没有问题。
按理说，如果第一次是假阳性，那么扩大培养应该不长，现在是PCR验证不出质粒条带，但是菌株又能够在抗生素的培养基中正常生长，这是什么情况？
不知道大家有没有遇到类似的问题。

其他质粒也出现过这种情况，很是费解。
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1楼 2024-07-25 10:38:23
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有可能质粒直接倒在平台上了，没有转入菌中，扩增的不是菌里的质粒，而是菌旁的？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2024-07-25 14:45:30
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a85202

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2024-07-25 14:45:30
有没有可能质粒直接倒在平台上了，没有转入菌中，扩增的不是菌里的质粒，而是菌旁的？

存在在这种可能，所以我对第一次验证对的菌落进行扩大后再次验证。

如果是没有转入菌体内，那么在进行扩大培养时，菌体应该不长，因为没有质粒的抗性，但是，我进行扩大培养时，菌体长起来了，说明是具有抗性的，但是PCR却验不出来。
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3楼2024-07-25 16:23:33
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