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ZZhepta

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助大神!大肠杆菌高密度发酵问题。 已有5人参与

希望做这方面的大佬帮我分析下大肠杆菌高密度发酵的问题。十分感谢!

我遇到的主要问题是,发酵6-12h时间,取样的菌体越来越容易沉降,发酵液味道越来越酸,且OD值后面就停滞不长了,发酵液色泽逐渐变成褐色,补料后的葡萄糖会被消耗,但是菌体浓度也不会长,好多个失败的罐子OD值只到了20左右,我查了下资料,说是乙酸抑制了,还请大佬帮我分析分析,做了50个罐子了,成功了3个,呜呜呜。

1.  配方是无机盐类型,起始葡萄糖浓度是20g/L,我想问下,中途条件合适的情况下,糖耗完,OD值能长到多少?
2.  发酵前期比生长速率怎么控制合适,每个小时的OD怎么变化呀?
3.   我给的起始条件是通气1:2,转速400,中途升转速至500,然后葡萄糖耗完时OD值为13左右,开始恒速流加补葡萄糖,2.5g/L/h。然后补着补着菌就不对了。

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lishuangls92

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基础培养阶段也不用刻意控制比生长速率,只要保证该阶段营养消耗完,溶氧出现反弹再进行补料,你的初始发酵工艺都有点不合适,初始阶段转速太高,溶氧太高,会导致后期提高转速溶氧都上不去的情况,菌体生长受限,就会出现你这些情况
3楼2024-07-24 16:49:55
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lishuangls92

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
很明显发酵工艺是有问题的,一般发酵初始阶段,通气量0.5-1VVM,转速100rpm就行了,设置溶氧联动自动调节,调到500-600rpm就可以关掉联动,等溶氧反弹后,再开始补料,像你说的这些问题,味道发酸,培养液基本上都是补进去的料液的颜色,菌体根本就没消耗,都是菌体开始衰老死亡了,补料速率快了或者糖浓度高了一些,可以考虑改变补料方式,或者降低补料浓度,一般可以联动补料或者指数补料,

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2楼2024-07-24 16:45:57
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后来就算

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、发酵6-12h,20g/l的初糖耗完,OD值能长到20以上。这个与你的培养基有关。
2、发酵前期营养不是限制因素,一般通过温度、pH控制、供养来控制生长,如前期200rpm,30%-40%的溶氧。
3、菌是工程菌么?是否已经排除杂菌等外围的影响?
什么时候积分不是零啊
5楼2024-07-25 15:17:53
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
除了楼上几位说的外,还有就是注意C/N比,比例不对也容易导致菌株不长,最后就是下罐的时候留意一下离心后的菌株状态,如果有大量的鼻涕状的粘稠物质,就说明菌株已经开始大量死亡了

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6楼2024-07-29 14:15:55
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