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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 求助大神！大肠杆菌高密度发酵问题。
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ZZhepta

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助大神！大肠杆菌高密度发酵问题。 已有5人参与

希望做这方面的大佬帮我分析下大肠杆菌高密度发酵的问题。十分感谢！

我遇到的主要问题是，发酵6-12h时间，取样的菌体越来越容易沉降，发酵液味道越来越酸，且OD值后面就停滞不长了，发酵液色泽逐渐变成褐色，补料后的葡萄糖会被消耗，但是菌体浓度也不会长，好多个失败的罐子OD值只到了20左右，我查了下资料，说是乙酸抑制了，还请大佬帮我分析分析，做了50个罐子了，成功了3个，呜呜呜。

1.  配方是无机盐类型，起始葡萄糖浓度是20g/L，我想问下，中途条件合适的情况下，糖耗完，OD值能长到多少？
2.  发酵前期比生长速率怎么控制合适，每个小时的OD怎么变化呀？
3.   我给的起始条件是通气1：2，转速400，中途升转速至500，然后葡萄糖耗完时OD值为13左右，开始恒速流加补葡萄糖，2.5g/L/h。然后补着补着菌就不对了。

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1楼 2024-07-24 10:20:50
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lishuangls92

铁虫 (初入文坛)
★
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很明显发酵工艺是有问题的，一般发酵初始阶段，通气量0.5-1VVM，转速100rpm就行了，设置溶氧联动自动调节，调到500-600rpm就可以关掉联动，等溶氧反弹后，再开始补料，像你说的这些问题，味道发酸，培养液基本上都是补进去的料液的颜色，菌体根本就没消耗，都是菌体开始衰老死亡了，补料速率快了或者糖浓度高了一些，可以考虑改变补料方式，或者降低补料浓度，一般可以联动补料或者指数补料，
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ZZhepta
2楼2024-07-24 16:45:57
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lishuangls92

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
基础培养阶段也不用刻意控制比生长速率，只要保证该阶段营养消耗完，溶氧出现反弹再进行补料，你的初始发酵工艺都有点不合适，初始阶段转速太高，溶氧太高，会导致后期提高转速溶氧都上不去的情况，菌体生长受限，就会出现你这些情况
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3楼2024-07-24 16:49:55
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ZZhepta

新虫 (初入文坛)
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4楼2024-07-25 00:38:20
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后来就算

金虫 (小有名气)
★
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1、发酵6-12h，20g/l的初糖耗完，OD值能长到20以上。这个与你的培养基有关。
2、发酵前期营养不是限制因素，一般通过温度、pH控制、供养来控制生长，如前期200rpm，30%-40%的溶氧。
3、菌是工程菌么？是否已经排除杂菌等外围的影响？
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什么时候积分不是零啊
5楼2024-07-25 15:17:53
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)
★
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除了楼上几位说的外，还有就是注意C/N比，比例不对也容易导致菌株不长，最后就是下罐的时候留意一下离心后的菌株状态，如果有大量的鼻涕状的粘稠物质，就说明菌株已经开始大量死亡了
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ZZhepta
6楼2024-07-29 14:15:55
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ZZhepta

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 草木贲华 at 2024-07-29 14:15:55
除了楼上几位说的外，还有就是注意C/N比，比例不对也容易导致菌株不长，最后就是下罐的时候留意一下离心后的菌株状态，如果有大量的鼻涕状的粘稠物质，就说明菌株已经开始大量死亡了

谢谢，问题已解决！确实是条件和培养基营养的问题。

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7楼2024-08-22 15:31:25
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学术大菜菜

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by lishuangls92 at 2024-07-24 16:45:57
很明显发酵工艺是有问题的，一般发酵初始阶段，通气量0.5-1VVM，转速100rpm就行了，设置溶氧联动自动调节，调到500-600rpm就可以关掉联动，等溶氧反弹后，再开始补料，像你说的这些问题，味道发酸，培养液基本上都是 ...

你好，请问初始阶段通气量调低的话发酵后期通气量是不是再需要手动调高？什么时候调到最大通气量呢?我遇到的问题是对数期溶氧在40-50%，增大补料也降不下来，但是后面会突然降低到接近零！苦恼求帮助
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8楼2025-06-08 22:18:10
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跳跳糖Vic

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
7楼: Originally posted by ZZhepta at 2024-08-22 15:31:25
谢谢，问题已解决！确实是条件和培养基营养的问题。
...

您好，请问一下是怎么解决的呀？ 我也遇见了这个问题，是不是前期长得太快乐。
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9楼2025-07-06 20:19:20
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