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汕头大学海洋科学接受调剂
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meizixijun

金虫 (小有名气)

[交流] 我的重组菌为啥不长?

我的载体是pET28a(+),连接一个大约1600bp的基因,可是就是转化不出。感受态对照(转化时只加感受态细胞,其他步骤都一样)在含kana平板上不长,在不含kana的平板上长,这说明感受态制备没问题,那是什么原因导致重组菌不长呢?知道的请帮帮忙啊!是连接出问题吗?我是16度连接16~24h,就是长也就长一株,我快郁闷死了。我的宿主菌直接用BL21的,这个有关系吗?听说一般都先用DH5a

[ Last edited by amisking on 2009-10-25 at 19:20 ]
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追求梦想,快乐着我的快乐
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jjlbest

木虫 (著名写手)

应该是连接出问题。
4楼2009-10-25 22:24:24
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by meizixijun at 2009-10-25 18:48:
我的载体是pET28a(+),连接一个大约1600bp的基因,可是就是转化不出。感受态对照(转化时只加感受态细胞,其他步骤都一样)在含kana平板上不长,在不含kana的平板上长,这说明感受态制备没问题,那是什么原因导致重 ...

用Bl21没有问题的。我觉得你做的对照并不能说明你的感受没有问题,很有可能是你的感受态效率太低,或者直接不行了的原因,你做的对照只能说明你的菌为bl21,不能说明他的效率。建议你做的转空质粒的对照试试,如果还不长,说明感受态出问题了!还有就是没有用错抗性板吧?
2楼2009-10-25 20:08:35
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star1987

木虫 (著名写手)

笑傲江湖


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
宿主没有问题,很有可能是连接出问题了,你也提到了,就是长也长一株
3楼2009-10-25 20:27:16
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yzuxhq368

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用哪家的酶,连接片段的浓度、比例等,都会影响连接效果
5楼2009-10-25 22:37:10
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