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fengaiqin

铜虫 (小有名气)

[交流] RNA提取方法

本操作流程适用于植物、藻类组织的总RNA提取,为文库制备提供高质量的RNA

1.分装1.5mL  2%CTAB裂解液到2.0mL EP管上,加入2%β-巯基乙醇,65℃预热。
2 用液氮预冷研钵,组织样品放入加有液氮的研钵中,在液氮下把组织样品充分研磨成粉末。把样品粉末转入到装有裂解液的EP管中,(每mL裂解液可加30mg组织样品)。
3 65℃、400-1400rpm孵育15min,室温冷却。4℃、12,000×g离心5min。
4 吸取上清液至2.0mL EP管中,每mL裂解液加入200μL氯仿/异戊醇(24:1),震荡混匀。
5 4℃、12,000×g离心10min。
6 吸取上清液至2.0mL EP管中,加入等上清体积 酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),震荡混匀。
7 4℃、12,000×g离心10min。
8 吸取上清液至新的2.0mL EP管中,加入等上清体积 氯仿/异戊醇(24:1),震荡混匀。
9 4℃、12,000×g离心10min。
10 吸取上清液至新的1.5mL离心管,注意不要吸到中间蛋白层,加入2/3上清液体积的异丙醇,轻轻颠倒混匀。
11 放入-20℃冰箱沉淀2h以上。
12 4℃、17,500×g离心20min。弃上清,加入1mL 75%乙醇,用移液器吹洗沉淀。
13 4℃、17,500×g离心3min,弃上清,短暂离心后吸去残留液体,晾干3-5min。
14 用20-200μL DEPC水或者 RNase-free水溶解沉淀。
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