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fengaiqin铜虫 (小有名气)
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RNA提取方法
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本操作流程适用于植物、藻类组织的总RNA提取，为文库制备提供高质量的RNA 1.分装1.5mL 2%CTAB裂解液到2.0mL EP管上，加入2%β-巯基乙醇，65℃预热。 2 用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成粉末。把样品粉末转入到装有裂解液的EP管中，（每mL裂解液可加30mg组织样品）。 3 65℃、400-1400rpm孵育15min，室温冷却。4℃、12,000×g离心5min。 4 吸取上清液至2.0mL EP管中，每mL裂解液加入200μL氯仿/异戊醇（24:1），震荡混匀。 5 4℃、12,000×g离心10min。 6 吸取上清液至2.0mL EP管中，加入等上清体积 酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），震荡混匀。 7 4℃、12,000×g离心10min。 8 吸取上清液至新的2.0mL EP管中，加入等上清体积 氯仿/异戊醇（24:1），震荡混匀。 9 4℃、12,000×g离心10min。 10 吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入2/3上清液体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀。 11 放入-20℃冰箱沉淀2h以上。 12 4℃、17,500×g离心20min。弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。 13 4℃、17,500×g离心3min，弃上清，短暂离心后吸去残留液体，晾干3-5min。 14 用20-200μL DEPC水或者 RNase-free水溶解沉淀。 |
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