24小时热门版块排行榜

返回列表

fengaiqin

铜虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 196.8
散金: 6
帖子: 215
在线: 349.3小时
虫号: 35395937
注册: 2024-04-26
专业: 基因表达调控与表观遗传学

[交流] RNA提取方法

本操作流程适用于植物、藻类组织的总RNA提取，为文库制备提供高质量的RNA

1.分装1.5mL 2%CTAB裂解液到2.0mL EP管上，加入2%β-巯基乙醇，65℃预热。
2 用液氮预冷研钵，组织样品放入加有液氮的研钵中，在液氮下把组织样品充分研磨成粉末。把样品粉末转入到装有裂解液的EP管中，（每mL裂解液可加30mg组织样品）。
3 65℃、400-1400rpm孵育15min，室温冷却。4℃、12,000×g离心5min。
4 吸取上清液至2.0mL EP管中，每mL裂解液加入200μL氯仿/异戊醇（24:1），震荡混匀。
5 4℃、12,000×g离心10min。
6 吸取上清液至2.0mL EP管中，加入等上清体积酚/氯仿/异戊醇（25:24:1），震荡混匀。
7 4℃、12,000×g离心10min。
8 吸取上清液至新的2.0mL EP管中，加入等上清体积氯仿/异戊醇（24:1），震荡混匀。
9 4℃、12,000×g离心10min。
10 吸取上清液至新的1.5mL离心管，注意不要吸到中间蛋白层，加入2/3上清液体积的异丙醇，轻轻颠倒混匀。
11 放入-20℃冰箱沉淀2h以上。
12 4℃、17,500×g离心20min。弃上清，加入1mL 75%乙醇，用移液器吹洗沉淀。
13 4℃、17,500×g离心3min，弃上清，短暂离心后吸去残留液体，晾干3-5min。
14 用20-200μL DEPC水或者 RNase-free水溶解沉淀。

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2024-05-22 16:49:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 fengaiqin 的主题更新

返回列表