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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母双杂交
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zjwang

木虫 (正式写手)

[交流] 酵母双杂交

在酵母双杂交系统中验证两个蛋白（X,Y）相互作用，如果AD-X和BD-Y能激活报告基因而AD-Y和BD-X不能激活报告基因，同时所有的对照都不能激活报告基因，能不能下结论这两个蛋白相互作用呢？
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1楼 2009-10-23 15:50:58
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-23 17:03
我觉得可以吧！
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2楼2009-10-23 16:37:31
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zjwang

木虫 (正式写手)
谢谢！你一般做的时候都做两套构建吗？
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3楼2009-10-23 17:03:14
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-10-23 17:03:
谢谢！你一般做的时候都做两套构建吗？

你说的两套构建的意思是BD和目的蛋白构建在一个载体上，AD和库基因构建在一个载体上吗？
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4楼2009-10-23 18:15:12
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zjwang

木虫 (正式写手)
两套构建是说同时构建AD-X和BD-Y及AD-Y和BD-X。
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5楼2009-10-23 18:34:04
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-26 11:16
350784478(金币+1,VIP+0): 10-26 19:21
楼主，你的这种情况，我现在也正在遭遇哦，就是AD-X和BD-Y有作用，然后换一下AD-Y和BD-X没有作用，由于我做了很多，然后跟老板讨论后，说可能是AD-Y抑制了Y的蛋白正常结构的形成，不过这是我的情况哦
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6楼2009-10-23 18:46:51
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zjwang

木虫 (正式写手)
这样啊，你做了很多是什么意思啊？我做了很多缺失构建，这个基因的片断作了很多，X-gal都能染蓝，能不能说就是结合呢？
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7楼2009-10-26 16:33:03
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:52
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-10-26 16:33:
这样啊，你做了很多是什么意思啊？我做了很多缺失构建，这个基因的片断作了很多，X-gal都能染蓝，能不能说就是结合呢？

那是有相互作用的，我做的不是构建缺失突变体，我是一个家族的基因俩俩相互作用，由于他们都是转录因子，我是想找，他们的相互作用pattern，有的可以形成homodiner有的可以形成heterodimer，像你说的那种情况，对调一下就好像没有作用了，这个不要紧，再做filter assay看看，变蓝的话是有相互作用的，对调后菌不长不影响结果的分析
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2009-10-27 18:34:13
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bbyu007

木虫 (正式写手)
★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:53
做一下pull down 验证一下
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我是笨笨鱼~~~
9楼2009-10-27 21:24:42
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:53
仅仅这些证据证明不了什么吧。酵母双杂交验证后，还要在哺乳动物细胞里（如果是动物蛋白的话）做co-ip，或者GST-PULL DOWN，共定位，等一系列的实验来证明是否有相互作用。
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10楼2009-10-27 23:59:12
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