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zjwang

木虫 (正式写手)

[交流] 酵母双杂交

在酵母双杂交系统中验证两个蛋白(X,Y)相互作用,如果AD-X和BD-Y能激活报告基因而AD-Y和BD-X不能激活报告基因,同时所有的对照都不能激活报告基因,能不能下结论这两个蛋白相互作用呢?
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


zjwang(金币+1,VIP+0): 10-23 17:03
我觉得可以吧!
2楼2009-10-23 16:37:31
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zjwang

木虫 (正式写手)

谢谢!你一般做的时候都做两套构建吗?
3楼2009-10-23 17:03:14
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-10-23 17:03:
谢谢!你一般做的时候都做两套构建吗?

你说的两套构建的意思是BD和目的蛋白构建在一个载体上,AD和库基因构建在一个载体上吗?
4楼2009-10-23 18:15:12
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zjwang

木虫 (正式写手)

两套构建是说同时构建AD-X和BD-Y及AD-Y和BD-X。
5楼2009-10-23 18:34:04
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gyesang

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★ ★
zjwang(金币+1,VIP+0): 10-26 11:16
350784478(金币+1,VIP+0): 10-26 19:21
楼主,你的这种情况,我现在也正在遭遇哦,就是AD-X和BD-Y有作用,然后换一下AD-Y和BD-X没有作用,由于我做了很多,然后跟老板讨论后,说可能是AD-Y抑制了Y的蛋白正常结构的形成,不过这是我的情况哦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2009-10-23 18:46:51
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zjwang

木虫 (正式写手)

这样啊,你做了很多是什么意思啊?我做了很多缺失构建,这个基因的片断作了很多,X-gal都能染蓝,能不能说就是结合呢?
7楼2009-10-26 16:33:03
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:52
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2009-10-26 16:33:
这样啊,你做了很多是什么意思啊?我做了很多缺失构建,这个基因的片断作了很多,X-gal都能染蓝,能不能说就是结合呢?

那是有相互作用的,我做的不是构建缺失突变体,我是一个家族的基因俩俩相互作用,由于他们都是转录因子,我是想找,他们的相互作用pattern,有的可以形成homodiner有的可以形成heterodimer,像你说的那种情况,对调一下就好像没有作用了,这个不要紧,再做filter assay看看,变蓝的话是有相互作用的,对调后菌不长不影响结果的分析
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2009-10-27 18:34:13
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bbyu007

木虫 (正式写手)


zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:53
做一下pull down 验证一下
我是笨笨鱼~~~
9楼2009-10-27 21:24:42
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)


zjwang(金币+1,VIP+0): 10-28 08:53
仅仅这些证据证明不了什么吧。酵母双杂交验证后,还要在哺乳动物细胞里(如果是动物蛋白的话)做co-ip,或者GST-PULL DOWN,共定位,等一系列的实验来证明是否有相互作用。
10楼2009-10-27 23:59:12
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