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典型case分享 | 基于质谱的蛋白质O-糖基化分析
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生物体内的糖基化修饰越来越受到关注，糖基化修饰主要分为n糖和o糖。对于哺乳动物而言，常见的o糖以连接在丝氨酸或苏氨酸的n-乙酰半乳糖胺（galnac）为基础，在酶的作用下进一步转移半乳糖或n-乙酰葡萄糖胺等糖基，从而形成四种核心结构。在这四种核心结构的基础上，已合成的糖苷还可以在酶的作用下进一步转移岩藻糖、唾液酸等糖基，从而形成更复杂的o糖。 含有o-galnac的糖蛋白在传统上被定义为粘蛋白或粘蛋白样蛋白。粘蛋白携带密集的o-galnac糖簇，亲水且带负电的o-聚糖易形成具有润滑作用的高度水合致密阵列，并作为抵御病原体和物理或化学损伤的保护屏障，因而常在呼吸道等各种器官的粘膜上表达。而最近，o-galnac被发现广泛分布在许多不具有粘蛋白样特质的蛋白质上。这些o糖在细胞中具有特殊功能，包括激素调节、脂质代谢和生长因子、信号转导等。部分研究者对果蝇的多肽α-n乙酰半乳糖胺转移酶基因进行rna干扰，发现果蝇特定的形态和功能效应受到影响，说明了发育过程中位点特异性o-糖基化的重要性。 随着质谱表征技术的更新换代，对各类生物体内的蛋白组和重组蛋白药物研究逐渐深入，许多非常规o糖修饰也得到了多角度的确证。例如当下表达抗体最常使用的cho细胞，其表达的重组人igg1轻链上的o-岩藻糖修饰，重组人igg2轻链上的o-甘露糖修饰等陆续被发现。针对这些非常规o糖对药物安全性和有效性的研究还在进行中，未来也可能会有更多非常规o糖修饰被揭晓。 与蛋白质的合成不同，o糖合成过程没有固定的模板遵循，o糖缺乏n糖的基序（nxs/t），因此在位点和糖链结构两个层面常具有较强的异质性。而随着对o糖生物学功能认识的深入，对o糖的深度表征也越来越得到生物制药从业者的关注。斯坦德生物医药大分子实验室选用s-bio公司的ezglyco® o糖制备试剂盒，以最小化非特异性o糖β消除反应。通过糖捕集珠除去蛋白和其他杂质，以便后续标记。荧光试剂标记后的o糖经除盐处理后即可上机分析。借助高效液相系统和高灵敏度的质谱仪，我们能在较短的实验周期内对标记后的o糖进行高置信度的确认。欢迎业内新老客户垂询！ 参考文献 [1]joanne chia, germaine goh, frederic bard. short o-galnac glycans: regulation and role in tumor development and clinical perspectives. [2]barry d shur, michael a ensslin, carey rodeheffer. sed1 function during mammalian sperm-egg adhesion. [3]katrine t.-b.g. schjoldager, henrik clausen. site-specific protein o-glycosylation modulates proprotein processing —deciphering specific functions of the large polypeptide galnac-transferase gene family. [4]liping zhang, kelly g. ten hagen. dissecting the biological role of mucin-type o-glycosylation using rna interference in drosophila cell culture. [5]john f valliere-douglass, lowell j brady, chris farnsworth, et al. o-fucosylation of an antibody light chain: characterization of a modification occurring on an igg1 molecule. [6]theresa martinez, danielle pace, lowell brady. characterization of a novel modification on igg2 light chain evidence for the presence of o-linked mannosylation. [ Last edited by 斯坦德检测集团 on 2024-5-9 at 11:36 ] |
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