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柯萨奇病毒B3致病毒性心肌炎动物模型
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心肌炎是什么病？ 心肌炎是指心肌发生的的局限性或弥漫性炎症病变，可由多种病因引起，主要是由病毒、细菌、立克次体等病原微生物感染而致，其中以病毒性心肌炎最为常见，如柯萨奇B组病毒、Echo病毒、脊髓灰质炎病毒、流感病毒等感染都可引起，另外免疫因素、物理损伤、药物等非感染因素也会引起心肌炎的发生。 目前该病发病机制不清，仍然没有药物可以完全治愈心肌炎。所以，建立合适的心肌炎模型，为研究心肌炎的发生发展机制和筛选治疗药物具有重要意义。 目前心肌炎模型多以心肌肌球蛋白(Cardiac myosin，CM)诱导，多肽诱导，树突状细胞诱导，柯萨奇病毒感染等方法构建。今天小编将柯萨奇病毒B3致病毒性心肌炎动物模型进行详解。 造模方法 选取4周龄雄性近交系BALB/C小鼠，体重（15~19）g，分为实验组和正常组。 注射部位常规消毒后，腹腔注射10-5即100TCID50/0.1 ml CVB3 0.1 ml，正常组腹腔注射等量0.1 mmol/L磷酸盐缓冲液0.1 ml。接种病毒时间定为第0天，至第7天时随机从各组取5只小鼠，于眼眶采血后处死小鼠留取心脏，将血离心分装、血浆冻存，将心脏冲洗称重后，用10%甲醛固定待做病理组织学检查，剩余小鼠饲养至第21天时，全部处死留取心脏，将心脏冲洗称重后，用10%甲醛固定待做病理组织学检查。 存活达第21天者视为存活，各组小鼠处死之前称重，心脏称重前用滤纸吸净。计算心脏重量/体重（HW/BW）比值与生存率。 各组小鼠用10%甲醛固定后石蜡包埋切片，HE染色,镜下观察组织病理学改变并记分。炎症细胞浸润，心肌坏死占每张心脏切片<25%（+）计1分，25%～50%（++）计 2 分，50%～75%（+++）计 3 分，>75% 计 4分。 采用自动生化分析仪测定血清肌酸激酶同工酶CK-MB的含量。 试验结果 1 HW/BW比值与生存率 实验组与正常组HW/BW比值结果分别为（0.0068±0.0006）和（0.0049±0.0001），两组比较P＜0.01，差异有统计学意义。 2 病理学检查结果 实验组小鼠心脏外膜肉眼可见少量白色点状、条纹状、斑块状以及出血点等。正常组无此现象。CVB3感染小鼠后第7天炎症细胞灶性浸润，分布在溶解坏死的心肌周围，更有意思的是发现大量淋巴细胞围绕神经组织浸润。 3 组织学检查结果 第7天时从各组随机抽取5只小鼠光镜检查，发现试验组小鼠心肌均有变性、坏死、炎症细胞浸润或有钙盐沉着，组织评分最低分为2.1分，最高分为4分；正常组未发现炎症细胞浸润与心肌坏死。 4 心肌酶CK-MB结果 第7天时试验组小鼠为(188.5±35.6)U/L，正常组为(45.3±11.2)U/L，两组比较 P＜0.01。 注意事项：病毒接种浓度要正确的配制。因心肌酶的升高与心肌的损伤基本平行，高浓度的病毒感染可致宿主细胞快速变性坏死，溶解。 选用BALB/C小鼠构建柯萨奇病毒感染引起的心肌炎模型（腹腔注射），造模方法简单，模型的成功率可达100%，重复性好，病理变化符合临床病毒性心肌病变，可用来研究病毒性心肌炎的生理，病理生理、生化等改变，也用于研究心肌炎的自然病程以及药物治疗心肌炎的疗效及其作用机制以及筛选抗病毒性心肌炎药物。 |
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