应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pcr鉴定阳性菌落的问题
91/1返回列表
查看: 970  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] pcr鉴定阳性菌落的问题

最近构建重组质粒用pcr进行鉴定，
发现有的样品能够p出大小相符的条带，只是没有阳性对照亮，而以水为阴性对照的样品没有p出条带。
请问有经验的虫友们，这种情况下假阳性的概率是不是很大呢？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-22 at 15:48 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-22 14:55:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

konggy

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做的这样的基本都是假阳性
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-10-22 15:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵，不好说，我每次挑20个菌做colony PCR，基本上都能扩增出来，然后再提取质粒酶切，全是阳性的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-10-22 16:18:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
我没经验
回复此楼
4楼2009-10-22 18:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjlbest

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌落PCR只是初步的鉴定，是不是假阳性要酶切鉴定了以后才知道。我的经验来说假阳性挺少的。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-10-22 18:32:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-22 18:58
我上次的菌落PCR也P出了条带，但是浓度很低，阳性对照的条带很量，两者大小一致，但亮度差别太大，于是就重做了一次，后来就只有阳性对照能P出来了，所以就认为是假阳性了。lZ的情况只是没有阳性对照亮，所以还是有希望的，再P一次，如果还能P出来，继续做测序或酶切鉴定，不就知道了吗
赞一下(21人) 回复此楼
为梦想努力。
6楼2009-10-22 18:34:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wordsworth3180 at 2009-10-22 14:55:
最近构建重组质粒用pcr进行鉴定，
发现有的样品能够p出大小相符的条带，只是没有阳性对照亮，而以水为阴性对照的样品没有p出条带。
请问有经验的虫友们，这种情况下假阳性的概率是不是很大呢？

[ Last edit ...

直接用重组质粒进行PCR的话一般是会很亮的，你可以酶切验证一下，那样得到的结果比较可信。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-10-22 22:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)
谢谢大家的经验
主要是酶切的话切下来的小片断只有100bp，一直都不成功，所以也看不出来。
已经p了几次了，条带都稳定存在
赞一下 回复此楼
8楼2009-10-22 22:35:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dandan20088810

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌斑PCR的假阳性是很常见的，因为在我们平时做转化时，把链接产物和感受态细胞混在一起，最后涂平板，在平板上会有好多没有转进去的连接产物，挑取菌斑时会将这些一起挑取，所以也会出现不太亮的目的条带，另外你的目的条带只有100bp这也增加了假阳性的几率。最好用质粒PCR ，或者将转化长出的菌斑，在抗性板划几次，有助于消除假阳性。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-10-23 15:09:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wordsworth3180 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +6 ￣^￣゜汗 2026-03-19 9/450 2026-03-23 19:53 by pswait
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +5 材化逐梦人 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:26 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭