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汕头大学海洋科学接受调剂
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

[交流] pcr鉴定阳性菌落的问题

最近构建重组质粒用pcr进行鉴定,
发现有的样品能够p出大小相符的条带,只是没有阳性对照亮,而以水为阴性对照的样品没有p出条带。
请问有经验的虫友们,这种情况下假阳性的概率是不是很大呢?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-22 at 15:48 ]
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dandan20088810

金虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
菌斑PCR的假阳性是很常见的,因为在我们平时做转化时,把链接产物和感受态细胞混在一起,最后涂平板,在平板上会有好多没有转进去的连接产物,挑取菌斑时会将这些一起挑取,所以也会出现不太亮的目的条带,另外你的目的条带只有100bp这也增加了假阳性的几率。最好用质粒PCR ,或者将转化长出的菌斑,在抗性板划几次,有助于消除假阳性。
9楼2009-10-23 15:09:30
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konggy

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做的这样的基本都是假阳性
2楼2009-10-22 15:26:54
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,不好说,我每次挑20个菌做colony PCR,基本上都能扩增出来,然后再提取质粒酶切,全是阳性的。
3楼2009-10-22 16:18:20
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jjlbest

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
菌落PCR只是初步的鉴定,是不是假阳性要酶切鉴定了以后才知道。我的经验来说假阳性挺少的。
5楼2009-10-22 18:32:25
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