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extratju

木虫 (小有名气)

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[交流] 求助：关于抑制蛋白水解

最近在做膜蛋白（GP5）的纯化，老板指出纯化过程中，我没有加入蛋白抑制剂，建议我使用pmsf，我是这方面的小白，想了解一下蛋白抑制的原理，和选择依据，请各位高手建议一下相关书籍和资料。

[ Last edited by amisking on 2009-10-17 at 10:02 ]

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1楼2009-10-17 01:54:44

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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★
extratju(金币+1):谢谢参与

你老板的意见也不一定就对。
我是专门做纯化的，很少有蛋白会那么快降解，大部分蛋白还是很结实的，所以我纯化的时候一般也很少用蛋白抑制剂。
关键是表达完后，要尽快处理，比如，如果不马上纯化，就要尽快离心，将菌体冻起来，这样可以放很久的，几个月没问题，不用担心降解。如果马上纯化，那当然最好，纯化的好的话，大部分细菌中的蛋白酶也都纯化掉了，降解也就没那么容易了。纯化好的蛋白放四度，也可以放一段时间。
老板的意见也不一定对，国内很对老板都是小白，很多时候都是瞎指挥，你按你自己想的做就行了。如果不想和老板对着干，你加就可以了，反正钱是老板的。抑制剂一般都不便宜的。