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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于抑制蛋白水解
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extratju

木虫 (小有名气)

[交流] 求助：关于抑制蛋白水解

最近在做膜蛋白（GP5）的纯化，老板指出纯化过程中，我没有加入蛋白抑制剂，建议我使用pmsf，我是这方面的小白，想了解一下蛋白抑制的原理，和选择依据，请各位高手建议一下相关书籍和资料。

[ Last edited by amisking on 2009-10-17 at 10:02 ]
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1楼 2009-10-17 01:54:44
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kitty8682

金虫 (正式写手)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
学习中.....
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2楼2009-10-17 08:34:12
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛～
★
extratju(金币+1):谢谢参与
帮忙顶起，我也想知道！
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平和悦衲！
3楼2009-10-17 08:53:49
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paulajjh

木虫 (著名写手)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
我也小白，帮忙顶起
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4楼2009-10-17 11:23:56
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nn0808

银虫 (小有名气)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
我也是了解得很粗浅,知道一些皮毛,比如每种蛋白酶都有特定的抑制剂.
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5楼2009-10-17 13:46:09
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
就是说你再纯化的过程中蛋白可能被水解，为了防止出现这种情况，加入蛋白酶抑制剂，其中pmsf是常用的。就像加RNase抑制剂防止RNA降解一个道理
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6楼2009-10-17 16:39:48
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xj22667

银虫 (小有名气)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
蛋白在破碎的过程中会降解，我们实验室在破碎之前都会加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解，利于蛋白的纯化 我们用的是罗氏公司的cocktail ，是片剂，自己拿超纯水溶解的 配好后可以连续用几个月的 效果不错的
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7楼2009-10-17 19:08:31
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
你老板的意见也不一定就对。
我是专门做纯化的，很少有蛋白会那么快降解，大部分蛋白还是很结实的，所以我纯化的时候一般也很少用蛋白抑制剂。
关键是表达完后，要尽快处理，比如，如果不马上纯化，就要尽快离心，将菌体冻起来，这样可以放很久的，几个月没问题，不用担心降解。如果马上纯化，那当然最好，纯化的好的话，大部分细菌中的蛋白酶也都纯化掉了，降解也就没那么容易了。纯化好的蛋白放四度，也可以放一段时间。
老板的意见也不一定对，国内很对老板都是小白，很多时候都是瞎指挥，你按你自己想的做就行了。如果不想和老板对着干，你加就可以了，反正钱是老板的。抑制剂一般都不便宜的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
8楼2009-10-17 20:22:03
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
我也小白，帮忙顶起
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Nevergiveup!
9楼2009-10-25 10:53:12
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missu

金虫 (小有名气)
★
extratju(金币+1):谢谢参与
PMSF是丝氨酸蛋白酶抑制剂，会抑制丝氨酸蛋白酶的活性，进而抑制其对蛋白质的降解作用。8楼说的有一定道理。楼主纯化的是膜蛋白，建议设计纯化方案时注意考虑其特殊性。
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10楼2009-10-25 13:50:12
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