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extratju

木虫 (小有名气)

[交流] 求助:关于抑制蛋白水解

最近在做膜蛋白(GP5)的纯化,老板指出纯化过程中,我没有加入蛋白抑制剂,建议我使用pmsf,我是这方面的小白,想了解一下蛋白抑制的原理,和选择依据,请各位高手建议一下相关书籍和资料。

[ Last edited by amisking on 2009-10-17 at 10:02 ]
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kitty8682

金虫 (正式写手)


extratju(金币+1):谢谢参与
学习中.....
2楼2009-10-17 08:34:12
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haoqian6135

木虫 (正式写手)

蜗牛~


extratju(金币+1):谢谢参与
帮忙顶起,我也想知道!
平和悦衲!
3楼2009-10-17 08:53:49
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paulajjh

木虫 (著名写手)


extratju(金币+1):谢谢参与
我也小白,帮忙顶起
4楼2009-10-17 11:23:56
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nn0808

银虫 (小有名气)


extratju(金币+1):谢谢参与
我也是了解得很粗浅,知道一些皮毛,比如每种蛋白酶都有特定的抑制剂.
5楼2009-10-17 13:46:09
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bioxixi

木虫 (著名写手)


extratju(金币+1):谢谢参与
就是说你再纯化的过程中蛋白可能被水解,为了防止出现这种情况,加入蛋白酶抑制剂,其中pmsf是常用的。就像加RNase抑制剂防止RNA降解一个道理
6楼2009-10-17 16:39:48
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xj22667

银虫 (小有名气)


extratju(金币+1):谢谢参与
蛋白在破碎的过程中会降解,我们实验室在破碎之前都会加入蛋白酶抑制剂,防止蛋白降解,利于蛋白的纯化 我们用的是罗氏公司的cocktail ,是片剂,自己拿超纯水溶解的 配好后可以连续用几个月的 效果不错的
7楼2009-10-17 19:08:31
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


extratju(金币+1):谢谢参与
你老板的意见也不一定就对。
我是专门做纯化的,很少有蛋白会那么快降解,大部分蛋白还是很结实的,所以我纯化的时候一般也很少用蛋白抑制剂。
关键是表达完后,要尽快处理,比如,如果不马上纯化,就要尽快离心,将菌体冻起来,这样可以放很久的,几个月没问题,不用担心降解。如果马上纯化,那当然最好,纯化的好的话,大部分细菌中的蛋白酶也都纯化掉了,降解也就没那么容易了。纯化好的蛋白放四度,也可以放一段时间。
老板的意见也不一定对,国内很对老板都是小白,很多时候都是瞎指挥,你按你自己想的做就行了。如果不想和老板对着干,你加就可以了,反正钱是老板的。抑制剂一般都不便宜的。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
8楼2009-10-17 20:22:03
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)


extratju(金币+1):谢谢参与
我也小白,帮忙顶起
Nevergiveup!
9楼2009-10-25 10:53:12
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missu

金虫 (小有名气)


extratju(金币+1):谢谢参与
PMSF是丝氨酸蛋白酶抑制剂,会抑制丝氨酸蛋白酶的活性,进而抑制其对蛋白质的降解作用。8楼说的有一定道理。楼主纯化的是膜蛋白,建议设计纯化方案时注意考虑其特殊性。
10楼2009-10-25 13:50:12
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