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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下

[交流] 细胞荧光标记的定量

大家好!请教一个问题:
做免疫荧光考察目的蛋白的核质转运。加药后,集聚于细胞核的目的蛋白转运到细胞质中,呈弥散分布(但荧光很明显,就是不像在细胞核中一样聚集成圆点状),这一过程用什么可以做到半定量?用IPP行不?
如果用共聚焦做定量,那么大概怎么操作?(转换为灰度图?再怎么怎么?);
请各位高手提点建议哦,谢谢!
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——穿越死亡之门,到我这里来,虽则梦想褪色,岁月集成的果实腐烂掉,但我是永恒的真理,你将再会见我,在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★
Airare(金币+2,VIP+0):多谢讨论 10-13 12:27
引用回帖:
Originally posted by Airare at 2009-10-13 11:07:
大家好!请教一个问题:
做免疫荧光考察目的蛋白的核质转运。加药后,集聚于细胞核的目的蛋白转运到细胞质中,呈弥散分布(但荧光很明显,就是不像在细胞核中一样聚集成圆点状),这一过程用什么可以做到半定量? ...

没做过,能不能把某种蛋白做一系列梯度(当然,这种梯度最好是二倍稀释),
然后标记荧光,然后照相?

然后就把各个梯度的 荧光强度 或 荧光照片直接列到图上。

我见过相关文献,测定胞内某物质的标记荧光,就有这么做的,
图是彩色的,很漂亮。如图示。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-10-13 at 12:13 ]
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-10-13 11:52:37
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下

引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-10-13 11:52:


没做过,能不能把某种蛋白做一系列梯度(当然,这种梯度最好是二倍稀释),
然后标记荧光,然后照相?

然后就把各个梯度的 荧光强度 或 荧光照片直接列到图上。

我见过相关文献,测定胞内某物质的标记荧 ...

多谢讨论哦!不同实验也许可以那么做吧。不过我需要考察的是,同样的细胞用不同的药物处理,使药物作用的目的蛋白不同程度的从细胞核中转运出来,因此想做个定量。因为细胞都是一样的,默认被作用的蛋白的量也是一样的。

现在是得到了药物作用后,目的蛋白不同程度的转运到细胞质中,想量化一样到底转到细胞质的百分比(细胞质荧光/细胞核荧光)多少?
——穿越死亡之门,到我这里来,虽则梦想褪色,岁月集成的果实腐烂掉,但我是永恒的真理,你将再会见我,在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
3楼2009-10-13 12:26:25
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

引用回帖:
Originally posted by Airare at 2009-10-13 12:26:


多谢讨论哦!不同实验也许可以那么做吧。不过我需要考察的是,同样的细胞用不同的药物处理,使药物作用的目的蛋白不同程度的从细胞核中转运出来,因此想做个定量。因为细胞都是一样的,默认被作用的蛋白的量也 ...

这个。。我没有经验。。。估计更麻烦!!。。。

实质问题是:
在同一图像内,计算某一区域的不规则图形占 具有某种特点的 全部不规则图形的比例。最好有灰度积分功能。

好像不容易哦!!!

荧光照相后,就拿那个图片去试试那个菌落计数软件吧,好像可以在某一图像内,计算不同图像的面积比例。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-10-13 at 12:36 ]
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-10-13 12:31:37
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