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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞荧光标记的定量
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下

[交流] 细胞荧光标记的定量

大家好！请教一个问题:
做免疫荧光考察目的蛋白的核质转运。加药后，集聚于细胞核的目的蛋白转运到细胞质中，呈弥散分布（但荧光很明显，就是不像在细胞核中一样聚集成圆点状），这一过程用什么可以做到半定量？用IPP行不？
如果用共聚焦做定量，那么大概怎么操作？（转换为灰度图？再怎么怎么？）；
请各位高手提点建议哦，谢谢！
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——穿越死亡之门，到我这里来，虽则梦想褪色，岁月集成的果实腐烂掉，但我是永恒的真理，你将再会见我，在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
1楼 2009-10-13 11:07:30
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★
Airare(金币+2,VIP+0):多谢讨论 10-13 12:27
引用回帖:
Originally posted by Airare at 2009-10-13 11:07:
大家好！请教一个问题:
做免疫荧光考察目的蛋白的核质转运。加药后，集聚于细胞核的目的蛋白转运到细胞质中，呈弥散分布（但荧光很明显，就是不像在细胞核中一样聚集成圆点状），这一过程用什么可以做到半定量？ ...

没做过，能不能把某种蛋白做一系列梯度(当然，这种梯度最好是二倍稀释），
然后标记荧光，然后照相？

然后就把各个梯度的 荧光强度 或 荧光照片直接列到图上。

我见过相关文献，测定胞内某物质的标记荧光，就有这么做的，
图是彩色的，很漂亮。如图示。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-10-13 at 12:13 ]
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2009-10-13 11:52:37
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Airare

金虫 (正式写手)

虫游天下
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-10-13 11:52:


没做过，能不能把某种蛋白做一系列梯度(当然，这种梯度最好是二倍稀释），
然后标记荧光，然后照相？

然后就把各个梯度的 荧光强度 或 荧光照片直接列到图上。

我见过相关文献，测定胞内某物质的标记荧 ...

多谢讨论哦！不同实验也许可以那么做吧。不过我需要考察的是，同样的细胞用不同的药物处理，使药物作用的目的蛋白不同程度的从细胞核中转运出来，因此想做个定量。因为细胞都是一样的，默认被作用的蛋白的量也是一样的。

现在是得到了药物作用后，目的蛋白不同程度的转运到细胞质中，想量化一样到底转到细胞质的百分比（细胞质荧光/细胞核荧光）多少？
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——穿越死亡之门，到我这里来，虽则梦想褪色，岁月集成的果实腐烂掉，但我是永恒的真理，你将再会见我，在你从此岸渡向彼岸的生命航程中...
3楼2009-10-13 12:26:25
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
引用回帖:
Originally posted by Airare at 2009-10-13 12:26:


多谢讨论哦！不同实验也许可以那么做吧。不过我需要考察的是，同样的细胞用不同的药物处理，使药物作用的目的蛋白不同程度的从细胞核中转运出来，因此想做个定量。因为细胞都是一样的，默认被作用的蛋白的量也 ...

这个。。我没有经验。。。估计更麻烦！！。。。

实质问题是：
在同一图像内，计算某一区域的不规则图形占 具有某种特点的 全部不规则图形的比例。最好有灰度积分功能。

好像不容易哦！！！

荧光照相后，就拿那个图片去试试那个菌落计数软件吧，好像可以在某一图像内，计算不同图像的面积比例。

[ Last edited by HarveyWang on 2009-10-13 at 12:36 ]
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2009-10-13 12:31:37
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