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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做实时定量PCR内参的选择
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moonfaceout

铜虫 (初入文坛)

[交流] 做实时定量PCR内参的选择 已有2人参与

最近要做定量PCR，来检测多倍体之间的表达差异，原来打算用18s做内参，但后来越想越不对劲，多倍体形态上差异很大，这些看家基因是不是也有变化，大家给点意见，用哪个基因做内参好？
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1楼 2009-10-12 09:23:34
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nancysea

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流 10-12 13:02
持家基因可选择的非常多:你可以多适几个看看他们的表达差异,真核生物可选择作为内标基因的持家基因有:甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、28S和18S rRNA等的持家基因作为内部参照，有英文文献关于这方面报道
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2楼2009-10-12 10:17:14
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7788945

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by moonfaceout at 2009-10-12 09:23:34:
最近要做定量PCR，来检测多倍体之间的表达差异，原来打算用18s做内参，但后来越想越不对劲，多倍体形态上差异很大，这些看家基因是不是也有变化，大家给点意见，用哪个基因做内参好？

请问这位仁兄后来选了那个内参？我也是做多倍体的，用β-actin觉得表达也不怎么稳定，现在想试下其他内参，能不能知道下？先行谢过
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3楼2011-04-11 14:01:29
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。我们实验室用BIODAI测得的扩增曲线起跳值一般在30左右，每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
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4楼2019-12-20 09:02:08
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