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恳请做过qPCR的战友帮忙
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这分报告是q PCR仪器BIO Rad 给出的。 实验是培养的MLEC（mice lung endothelial cell) 加入不同浓度VEGF(5,15,25,50,100,500ng)6小时后提总RNA，反转录cDNA,再用BIO Rad扩出的EphB4基因。目的是要检验VEGF对EphB4表达的影响。用gapdh做内参，老板说结果不可信，因为缺少阳性对照。 请问大家，所谓阳性对照起什么作用呢？结果分析时阳性对照的系列数据有什么作用？而且我该选什么作为阳性对照？ 1.肯定表达EPhB4的细胞,例如人或鼠静脉内皮细胞，对应加入VEGF，看EphB4表达； 2.仍然用MLEC，只是找出一种这种细胞中在VEGF刺激下肯定表达的基因，如文献证明了的notch4; 查了些文献，英文的，越看越糊涂，以上两种我应该用哪个为我实验的阳性对照？还有这份报告有什么问题吗？那个做出来的图是指EphB4的mRNA transcription level呢，还是EphB4 gene expression?这二者有区别没？ 多谢多谢，急盼解答。 |
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