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蝶谷医仙

新虫 (小有名气)

[交流] 恳请做过qPCR的战友帮忙

这分报告是q PCR仪器BIO Rad 给出的。
实验是培养的MLEC(mice lung endothelial cell) 加入不同浓度VEGF(5,15,25,50,100,500ng)6小时后提总RNA,反转录cDNA,再用BIO Rad扩出的EphB4基因。目的是要检验VEGF对EphB4表达的影响。用gapdh做内参,老板说结果不可信,因为缺少阳性对照。
请问大家,所谓阳性对照起什么作用呢?结果分析时阳性对照的系列数据有什么作用?而且我该选什么作为阳性对照?
1.肯定表达EPhB4的细胞,例如人或鼠静脉内皮细胞,对应加入VEGF,看EphB4表达;
2.仍然用MLEC,只是找出一种这种细胞中在VEGF刺激下肯定表达的基因,如文献证明了的notch4;
查了些文献,英文的,越看越糊涂,以上两种我应该用哪个为我实验的阳性对照?还有这份报告有什么问题吗?那个做出来的图是指EphB4的mRNA transcription level呢,还是EphB4 gene expression?这二者有区别没?
多谢多谢,急盼解答。
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流 10-11 09:47
我的想法是仍然用MLEC细胞,找一种经验证一定能对EphB4基因表达起作用的物质做阳性对照
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2009-10-11 08:44:54
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
阳性对照用第二种好吧,找一个文献报道过的不同浓度VEGF对其表达有影响的基因作为阳性对照。
3楼2009-10-11 10:13:49
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huayingxin

木虫 (著名写手)

虫之圣者

我也遇到同样的问题。
无端更渡桑乾水,却望并州是故乡
4楼2009-10-11 13:06:25
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