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catty829银虫 (小有名气)
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[交流]
求助关于菌种诱变的具体操作细节
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因为本人没有具体做过诱变，所以您如果愿意帮助的话，写的一定要详细、具体，具体到准备几个平皿、先后顺序、搅拌怎么实现（是否要灭菌）等，总之要比发表的论文或硕士论文要具体，要具体到 每一步怎么实现。金币还可以增加…… [ Last edited by 350784478 on 2009-10-10 at 13:30 ] |
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zj520315
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15楼2009-10-26 15:24:09
susizheng
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生命核心(金币+2,VIP+0):谢谢交流！ 10-10 13:18
catty829(金币+5,VIP+0):非常感谢。搅拌计需要消毒吗？ 10-22 12:46
生命核心(金币+2,VIP+0):谢谢交流！ 10-10 13:18
catty829(金币+5,VIP+0):非常感谢。搅拌计需要消毒吗？ 10-22 12:46
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紫外诱变：操作在无菌条件下进行，照明用红灯或黑暗中操作。 1、确定好诱变紫外强度，诱变距离。（无菌操作台里面的紫外灯就可以了） 2、诱变：在灭菌平板铺上一薄层菌液（5mL左右，OD600=0.6-1.0），在转子的搅拌下（转子搅拌计用过吧，只开搅拌），敞口在紫外下进行诱变，设置不同的诱变时间梯度（细菌比较脆弱，诱变时间在几十秒到1分钟之内）。 3、稀释涂板：将经不同时间诱变的菌液稀释涂平板（稀释度在实验前应该要摸索，尽量使平板上的菌落容易计数，一般对照组菌落在150-200个左右较合适），每个时间段做3-5个平行，做一不诱变组为参照。 4、培养：将平板用黑色塑料袋包严，于培养箱中培养（培养过程中不能打开查看，防止光修复，因此培养时间在实验前要进行摸索），直到长出单个菌落。 5、计数，求致死率。致死率=（对照组菌落数-诱变组菌落数）/对照组菌落数 6、绘制致死曲线，选取致死率在80%-90%辐射时间作为诱变用量 7、以后的实验就是在这个诱变剂用量下进行，然后在成活的菌落中筛选优势菌了。 |
2楼2009-10-10 09:31:12
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3楼2009-10-22 12:50:10
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catty829(金币+4,VIP+0): 10-23 08:39
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二楼说的很详细清楚了 1.不是5s、10s、15s各做一个，而是做三个，就是说要有平行对照，一个的话有可能是特殊情况，三个，或者更多才能说明问题。 说的更白一些，就是你一共至少要做9块诱导平板，5s后拿出三个？10s后再拿出三个？直到全部做完。 2.除了诱导的平板，你还要做不诱导的对照。 3.拿出的平板用黑纸包着，放培养箱里培养，一定要包好黑纸，因为可见光对细胞有修复作用。这一点二楼也说得很清楚呀 4.关于转子的问题：这个为什么要用转子，个人认为只要把菌液用涂布棒涂匀就可以了，而且不用那么多菌液，5ml太多了吧， |
4楼2009-10-22 14:35:59
susizheng
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，只要把平板铺上薄薄一层就可以了，加转子，是因为让菌液里面的菌体和液面菌体紫外照射均匀，说实话，我操作的时候也没用转子，直接带橡胶手套伸进操作台摇，有时候天气热，手套都没戴，
我要这样说，楼主肯定不敢做了，安全起见，还是用转子吧（转子要放进菌液，要灭菌的）。
5楼2009-10-22 16:15:17
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