| 查看: 1123 | 回复: 17 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
catty829银虫 (小有名气)
|
[交流]
求助关于菌种诱变的具体操作细节
|
||
|
因为本人没有具体做过诱变，所以您如果愿意帮助的话，写的一定要详细、具体，具体到准备几个平皿、先后顺序、搅拌怎么实现（是否要灭菌）等，总之要比发表的论文或硕士论文要具体，要具体到 每一步怎么实现。金币还可以增加…… [ Last edited by 350784478 on 2009-10-10 at 13:30 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！
已经有5人回复
-
26/27申博自荐
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有7人回复
-
河北省自然科学基金
已经有7人回复
-
揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标
已经有4人回复
-
青B发送上会通知了吗
已经有7人回复
-
博士申请
已经有3人回复
-
投稿求助，期刊
已经有8人回复
-
献血感触
已经有13人回复
zj520315
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1556
- 帖子: 144
- 在线: 36.1小时
- 虫号: 421507
- 注册: 2007-07-14
- 性别: MM
- 专业: 微生物遗传育种学
15楼2009-10-26 15:24:09
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- BioEPI: 8
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
生命核心(金币+2,VIP+0):谢谢交流！ 10-10 13:18
catty829(金币+5,VIP+0):非常感谢。搅拌计需要消毒吗？ 10-22 12:46
生命核心(金币+2,VIP+0):谢谢交流！ 10-10 13:18
catty829(金币+5,VIP+0):非常感谢。搅拌计需要消毒吗？ 10-22 12:46
|
紫外诱变：操作在无菌条件下进行，照明用红灯或黑暗中操作。 1、确定好诱变紫外强度，诱变距离。（无菌操作台里面的紫外灯就可以了） 2、诱变：在灭菌平板铺上一薄层菌液（5mL左右，OD600=0.6-1.0），在转子的搅拌下（转子搅拌计用过吧，只开搅拌），敞口在紫外下进行诱变，设置不同的诱变时间梯度（细菌比较脆弱，诱变时间在几十秒到1分钟之内）。 3、稀释涂板：将经不同时间诱变的菌液稀释涂平板（稀释度在实验前应该要摸索，尽量使平板上的菌落容易计数，一般对照组菌落在150-200个左右较合适），每个时间段做3-5个平行，做一不诱变组为参照。 4、培养：将平板用黑色塑料袋包严，于培养箱中培养（培养过程中不能打开查看，防止光修复，因此培养时间在实验前要进行摸索），直到长出单个菌落。 5、计数，求致死率。致死率=（对照组菌落数-诱变组菌落数）/对照组菌落数 6、绘制致死曲线，选取致死率在80%-90%辐射时间作为诱变用量 7、以后的实验就是在这个诱变剂用量下进行，然后在成活的菌落中筛选优势菌了。 |
2楼2009-10-10 09:31:12
catty829
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 396.8
- 帖子: 97
- 在线: 3.7小时
- 虫号: 479160
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2009-10-22 12:50:10
zier1011
木虫 (著名写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3224.2
- 散金: 295
- 红花: 11
- 帖子: 1230
- 在线: 268.4小时
- 虫号: 796939
- 注册: 2009-06-19
- 性别: MM
- 专业: 微生物
★ ★ ★ ★
catty829(金币+4,VIP+0): 10-23 08:39
catty829(金币+4,VIP+0): 10-23 08:39
|
二楼说的很详细清楚了 1.不是5s、10s、15s各做一个，而是做三个，就是说要有平行对照，一个的话有可能是特殊情况，三个，或者更多才能说明问题。 说的更白一些，就是你一共至少要做9块诱导平板，5s后拿出三个？10s后再拿出三个？直到全部做完。 2.除了诱导的平板，你还要做不诱导的对照。 3.拿出的平板用黑纸包着，放培养箱里培养，一定要包好黑纸，因为可见光对细胞有修复作用。这一点二楼也说得很清楚呀 4.关于转子的问题：这个为什么要用转子，个人认为只要把菌液用涂布棒涂匀就可以了，而且不用那么多菌液，5ml太多了吧， |
4楼2009-10-22 14:35:59
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- BioEPI: 8
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
，只要把平板铺上薄薄一层就可以了，加转子，是因为让菌液里面的菌体和液面菌体紫外照射均匀，说实话，我操作的时候也没用转子，直接带橡胶手套伸进操作台摇，有时候天气热，手套都没戴，
我要这样说，楼主肯定不敢做了，安全起见，还是用转子吧（转子要放进菌液，要灭菌的）。
5楼2009-10-22 16:15:17
catty829
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 396.8
- 帖子: 97
- 在线: 3.7小时
- 虫号: 479160
- 注册: 2007-12-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
6楼2009-10-23 08:39:55
7楼2009-10-23 09:35:24
zier1011
木虫 (著名写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3224.2
- 散金: 295
- 红花: 11
- 帖子: 1230
- 在线: 268.4小时
- 虫号: 796939
- 注册: 2009-06-19
- 性别: MM
- 专业: 微生物
8楼2009-10-23 11:14:25
9楼2009-10-23 11:28:23
zhhl2981
木虫 (职业作家)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 4029.1
- 散金: 198
- 帖子: 3347
- 在线: 420.1小时
- 虫号: 577276
- 注册: 2008-06-22
- 专业: 生物化工与食品化工
10楼2009-10-23 15:30:29
10