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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于菌种诱变的具体操作细节
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catty829

银虫 (小有名气)

[交流] 求助关于菌种诱变的具体操作细节

因为本人没有具体做过诱变，所以您如果愿意帮助的话，写的一定要详细、具体，具体到准备几个平皿、先后顺序、搅拌怎么实现（是否要灭菌）等，总之要比发表的论文或硕士论文要具体，要具体到 每一步怎么实现。金币还可以增加……

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-10 at 13:30 ]
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1楼 2009-10-10 08:53:56
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
catty829(金币+3,VIP+0): 10-23 08:39
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-10-22 14:35:
二楼说的很详细清楚了
1.不是5s、10s、15s各做一个，而是做三个，就是说要有平行对照，一个的话有可能是特殊情况，三个，或者更多才能说明问题。
说的更白一些，就是你一共至少要做9块诱导平板，5s后拿出三个？ ...

5 mL是个大致体积，因为我的平板大嘛，只要把平板铺上薄薄一层就可以了，加转子，是因为让菌液里面的菌体和液面菌体紫外照射均匀，说实话，我操作的时候也没用转子，直接带橡胶手套伸进操作台摇，有时候天气热，手套都没戴，我要这样说，楼主肯定不敢做了，安全起见，还是用转子吧（转子要放进菌液，要灭菌的）。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-10-22 16:15:17
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
生命核心(金币+2,VIP+0):谢谢交流！ 10-10 13:18
catty829(金币+5,VIP+0):非常感谢。搅拌计需要消毒吗？ 10-22 12:46
紫外诱变：操作在无菌条件下进行，照明用红灯或黑暗中操作。
1、确定好诱变紫外强度，诱变距离。（无菌操作台里面的紫外灯就可以了）
2、诱变：在灭菌平板铺上一薄层菌液（5mL左右，OD600=0.6-1.0），在转子的搅拌下（转子搅拌计用过吧，只开搅拌），敞口在紫外下进行诱变，设置不同的诱变时间梯度（细菌比较脆弱，诱变时间在几十秒到1分钟之内）。
3、稀释涂板：将经不同时间诱变的菌液稀释涂平板（稀释度在实验前应该要摸索，尽量使平板上的菌落容易计数，一般对照组菌落在150-200个左右较合适），每个时间段做3-5个平行，做一不诱变组为参照。
4、培养：将平板用黑色塑料袋包严，于培养箱中培养（培养过程中不能打开查看，防止光修复，因此培养时间在实验前要进行摸索），直到长出单个菌落。
5、计数，求致死率。致死率=（对照组菌落数-诱变组菌落数）/对照组菌落数
6、绘制致死曲线，选取致死率在80%-90%辐射时间作为诱变用量
7、以后的实验就是在这个诱变剂用量下进行，然后在成活的菌落中筛选优势菌了。
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Thank-you，so-blue.
2楼2009-10-10 09:31:12
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catty829

银虫 (小有名气)

还有问题

1、请问搅拌机需要消毒吗？
2、在无菌室制作孢子液，然后再拿出无菌室测其OD值，然后再回到无菌室进行稀释，是这样的吗？
3、如果设置3个时间梯度：5s、10s、15s。是不是三个平皿都放在紫外下，5s后拿出一个？10s后再拿出一个？直到全部做完。拿出的平皿放置何处？
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3楼2009-10-22 12:50:10
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zier1011

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
catty829(金币+4,VIP+0): 10-23 08:39
二楼说的很详细清楚了
1.不是5s、10s、15s各做一个，而是做三个，就是说要有平行对照，一个的话有可能是特殊情况，三个，或者更多才能说明问题。
说的更白一些，就是你一共至少要做9块诱导平板，5s后拿出三个？10s后再拿出三个？直到全部做完。
2.除了诱导的平板，你还要做不诱导的对照。
3.拿出的平板用黑纸包着，放培养箱里培养，一定要包好黑纸，因为可见光对细胞有修复作用。这一点二楼也说得很清楚呀
4.关于转子的问题：这个为什么要用转子，个人认为只要把菌液用涂布棒涂匀就可以了，而且不用那么多菌液，5ml太多了吧，
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花还香香的
4楼2009-10-22 14:35:59
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