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铁虫 (小有名气)

[交流] 蛋白质为何在酶切缓冲液中出现沉淀

请教各位：我的蛋白是重组His蛋白，用Ni柱纯化后采用脱盐柱脱盐并且置换为酶切缓冲液，放置1天后会出现少量的沉淀，用重组牛肠激酶酶切后，则会出现大量的沉淀，我的蛋白损失很多，请问是什么原因啊？酶切缓冲液就是25 mM Tris-HCl，50 mM NaCl, 2 mM CaCl2，谢谢啦！！！

1楼 2009-10-09 10:56:00

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木虫 (正式写手)

酶切时的温度变化是多少要考虑，还有就是酶的活性程度是不是很高，你那个蛋白是不是很本身就有问题

雄关漫道真如铁，而今迈步从头越

2楼2009-10-09 12:56:03

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铁虫 (小有名气)

就是一直在室温下进行酶切，酶的活性也很好，蛋白是重组蛋白，经过NI柱纯化后的

3楼2009-10-09 14:45:05

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