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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶体金免疫层析 已有3人参与

各位大佬,我想问一下就是我最近组装的试纸条,我用的是竞争法,用同一批试纸条做空白对照时侯有的出现假阳,有的T线强于C线,而且这种现象很频繁,不是个别现象,划线的时候划的也很均匀,然后不同T线浓度的试纸条做空白对照的时候也会有假阳出现,用金标抗体试以前组装的试纸条就没有出现过假阳的情况,各位大佬求指点

@dut_ameng @xiejf @nowitzki_ci @神魔流转 @wulishi8 @yswyx 发自小木虫Android客户端
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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 159236478 at 2023-08-28 16:32:54
机器划线应该没问题
其他方法配对成功说明抗原抗体结合没问题
出现假阳性应该是:
1.胶体金上面抗体过多或封闭不到位,您已降低抗体含量,可以调整封闭方案
2.样品垫不仅有PEG成份,还有离子强度和pH两因素,提供抗 ...

谢谢大哥。1、我的封闭溶剂是用的10%的BSA,终浓度1%,我之前合成的胶体金是现在胶体金溶液浓度的10倍左右,但是我现在合成金标抗体时加的封闭溶液体积没变,我怀疑可能封闭溶剂过量了,2、如果减少封闭溶液量不行我再换换其他种类的封闭溶剂试试,3、还有我的试纸条在做空白时有时候会出假阳,但是假阳有但没有特别夸张,我还想着重新换一批次的T线抗原试试

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8楼2023-08-30 00:28:48
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ps-pass

新虫 (小有名气)

你好,请问你的问题解决了吗,可以和你交流一下吗,

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9楼2023-09-10 11:14:52
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普通回帖

159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.调整胶体金上面的抗体含量   
2. 调整T线浓度
3.  更换样品垫缓冲配方
仅供参考!

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云山苍苍,江水泱泱,先生之风,山高水长
2楼2023-08-26 08:21:19
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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 159236478 at 2023-08-26 08:21:19
1.调整胶体金上面的抗体含量   
2. 调整T线浓度
3.  更换样品垫缓冲配方
仅供参考!

谢谢大哥指点,1.金上抗体量是已经优化好的最少抗体量,离心复溶后没有死金,2.我也试了不同T线浓度做了空白也会偶尔出现假阳,样品垫我买来没有经过任何处理,3.我用现在合成的金标抗体上样到以前组装的试纸条(样品垫没有经过任何处理),做空白全是正常的
我想可不可能是划线机器的问题,我这种结果很像划线的时候T线抗原分布不均导致的

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3楼2023-08-26 15:08:14
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

就您的问题:
1.T线C线是机器喷的还是手工画?
2.金标垫、样品垫可以处理下,增加缓冲能力
3.您的反应体系其他免疫方法是否配对?

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云山苍苍,江水泱泱,先生之风,山高水长
4楼2023-08-27 08:15:02
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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

5楼2023-08-27 16:55:44
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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

2、我这个没有金标垫,只有样品垫,样品垫处理一般是用peg10000吗  3、现在的抗原抗体是之前用的,之前的实验已经做好了,没有问题

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6楼2023-08-27 16:58:05
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159236478

至尊木虫 (知名作家)

游来游去之一级游神

机器划线应该没问题
其他方法配对成功说明抗原抗体结合没问题
出现假阳性应该是:
1.胶体金上面抗体过多或封闭不到位,您已降低抗体含量,可以调整封闭方案
2.样品垫不仅有PEG成份,还有离子强度和pH两因素,提供抗原抗体反应环境
3.纳米金颗粒出现变性,无差异吸附蛋白,导致假阳性
供您参考

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云山苍苍,江水泱泱,先生之风,山高水长
7楼2023-08-28 16:32:54
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会飞的猪tao

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ps-pass at 2023-09-10 11:14:52
你好,请问你的问题解决了吗,可以和你交流一下吗,

可以加个联系方式

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10楼2023-09-13 23:30:08
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