| 查看: 708 | 回复: 0 | |||
[交流]
抗体保存好，实验失败少
|
|
一、保存温度和条件 很多抗体的最佳保存条件是分装成小包装冻存于-20°C或-80°C。分装能使冻融引起的损失减到最小，同时可避免多次在一个管内取样而由枪头引入的污染。分装冻存的抗体，融解一次后剩余抗体应保存于4°C。收到抗体后，应10,000 x g 离心20秒，使管口螺纹内的抗体溶液全部离心至管底，用低蛋白吸附性的微量离心管分装。分装量的多少取决于每次试验的使用量。分装量不能少于10μl；分装量越少，由于蒸发和吸附于管内壁而引起的损失会越大。 除了腹水液含蛋白酶应立即冻存外，大多数抗体接收后可在4°C保存一至两周，随后可冻存以长期保存。同样，应按照说明书推荐的条件进行保存。 二、特殊情况 1、酶联抗体，不应冻存，4°C可保证稳定。冻融会降低酶的活性，同时影响抗体的吸附能力。 2、偶联标记的抗体，无论是标记的荧光染料、酶还是生物素，都应保存于深色的管内并包裹上铝箔。如果暴露在光线下可能会减弱偶联标记物的活性。荧光标记物尤其容易受到光漂白作用，整个实验过程中均应避光。 3、免疫球蛋白G3同种型抗体冻融后易形成聚合物，因此应一直保存于4°C。 4、用叠氮化钠防止污染 为防止微生物污染，在抗体溶液中应加入叠氮化钠，终浓度为0.02%（质量百分比）。 5、什么时候不能用叠氮化钠 如果用抗体标记活细胞，或用于体内实验，确保所用制剂中不含叠氮化钠。这种抗生素对大多数有机体都有毒性：会阻断细胞色素电子传递系统的信号。 叠氮化钠会干扰胺基的偶联标记，应在进行标记之前将其除去。标记后抗体可保存于叠氮化钠，也可用不含胺基的硫柳汞替代。叠氮化钠可用透析或凝胶过滤法从抗体溶液中除去。免疫球蛋白 G的分子量是150,000 kDa（免疫球蛋白M的分子量是600,000 kDa），叠氮化钠的分子量是65道尔顿。使用14,000 kDa的微量透析装置，随着叠氮化钠的扩散，抗体将保留。将带有烧杯的磁力搅拌器置于4°C搅拌透析装置6小时 , 每毫升抗体溶液要用至少1升的磷酸盐缓冲液。更换2次磷酸盐缓冲液，每次均搅拌至少6小时。如果可以的话，所有材料均要求无菌，所有溶液都应无菌配制。 三、冻存 / 复苏的损失 反复冻融可使抗体变性，使其形成聚合物而降低了抗体结合能力。 大多数抗体在-20°C保存就足够了，没有必要置于-80°C保存。千万不要使用无霜的冰箱。反复冻融能减少霜的形成，但这正是应该避免的。同理，抗体应该放置于冰箱中温度变化最小的部位，如应放置于冰箱格里，而不应放置于冰箱门上。 稀释至工作浓度的抗体最好不要在4°C保存超过一天时间。通常蛋白质在较高浓度保存时不易发生降解，理想浓度为1mg/ml或更高，因为抗体溶液中包含了如牛血清白蛋白等蛋白质稳定剂。加入的蛋白可吸附于管壁从而使抗体的损失减到最小。对用于聚合的抗体，不应加入蛋白稳定剂，因为其可能会与抗体竞争而降低抗体的聚合活性。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有87人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
