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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于连接问题
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shysh7952

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于连接问题

我的片段有1.7kb，我要连接到pet30a（+）上。我用nde1和sal1双酶切却怎么也连不上。老板让去掉信号肽，所以必须用nde1 但说明书上说nde1需要平端连接条件而sal1是粘末端连接。我都连了一个月了，怎么也连不上，请问大家有什么好的连接方法吗？谢谢大家！
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1楼 2009-10-08 20:56:09
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kakicoco

铁虫 (小有名气)
★
shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-9 10:43
你的片段有没有先克隆到T载体上？？如果从T载上来的话，可能顺序反了
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7楼2009-10-08 23:48:46
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-8 21:36
shysh7952(金币+1,VIP+0):直接扩的。哦，我没想到谢谢了 10-8 21:59
你的1.7k的片段是怎么来的？加酶切位点的，直接扩的还是从载体上切下来的？
直接扩然后酶切的要注意了，nde1的保护碱基要很多才行（>10bp）~~~如果是你扩了先连别的载体（比如T）,然后再切下来，再去和pet连，估计就没事了。
lz想想是不是这方面的原因。
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小木虫之有关部门负责人
2楼2009-10-08 21:23:07
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
好像没描述清楚，就是Nde I要有长的保护碱基，否则酶切切不开的，这样你怎么连都连不上的
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小木虫之有关部门负责人
3楼2009-10-08 21:27:34
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villyw

金虫 (初入文坛)
★
shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
可以试试TA克隆，一般都能搞定。
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4楼2009-10-08 21:37:10
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