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汕头大学海洋科学接受调剂
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shysh7952

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于连接问题

我的片段有1.7kb,我要连接到pet30a(+)上。我用nde1和sal1双酶切却怎么也连不上。老板让去掉信号肽,所以必须用nde1 但说明书上说nde1需要平端连接条件而sal1是粘末端连接。我都连了一个月了,怎么也连不上,请问大家有什么好的连接方法吗?谢谢大家!
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villyw

金虫 (初入文坛)


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
可以试试TA克隆,一般都能搞定。
4楼2009-10-08 21:37:10
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-8 21:36
shysh7952(金币+1,VIP+0):直接扩的。哦,我没想到谢谢了 10-8 21:59
你的1.7k的片段是怎么来的?加酶切位点的,直接扩的还是从载体上切下来的?
直接扩然后酶切的要注意了,nde1的保护碱基要很多才行(>10bp)~~~如果是你扩了先连别的载体(比如T),然后再切下来,再去和pet连,估计就没事了。
lz想想是不是这方面的原因。
小木虫之有关部门负责人
2楼2009-10-08 21:23:07
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
好像没描述清楚,就是Nde I要有长的保护碱基,否则酶切切不开的,这样你怎么连都连不上的
小木虫之有关部门负责人
3楼2009-10-08 21:27:34
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shysh7952

铜虫 (初入文坛)

谢谢大家!我再试一下看看!
5楼2009-10-08 22:10:23
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