24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1029  |  回复: 15
当前主题已经存档。

shysh7952

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于连接问题

我的片段有1.7kb,我要连接到pet30a(+)上。我用nde1和sal1双酶切却怎么也连不上。老板让去掉信号肽,所以必须用nde1 但说明书上说nde1需要平端连接条件而sal1是粘末端连接。我都连了一个月了,怎么也连不上,请问大家有什么好的连接方法吗?谢谢大家!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 10-8 21:36
shysh7952(金币+1,VIP+0):直接扩的。哦,我没想到谢谢了 10-8 21:59
你的1.7k的片段是怎么来的?加酶切位点的,直接扩的还是从载体上切下来的?
直接扩然后酶切的要注意了,nde1的保护碱基要很多才行(>10bp)~~~如果是你扩了先连别的载体(比如T),然后再切下来,再去和pet连,估计就没事了。
lz想想是不是这方面的原因。
小木虫之有关部门负责人
2楼2009-10-08 21:23:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
好像没描述清楚,就是Nde I要有长的保护碱基,否则酶切切不开的,这样你怎么连都连不上的
小木虫之有关部门负责人
3楼2009-10-08 21:27:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

villyw

金虫 (初入文坛)


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-8 21:59
可以试试TA克隆,一般都能搞定。
4楼2009-10-08 21:37:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shysh7952

铜虫 (初入文坛)

谢谢大家!我再试一下看看!
5楼2009-10-08 22:10:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakicoco

铁虫 (小有名气)

你的片段有没有先克隆到T载体上??如果从T载上来的话,可能顺序反了
6楼2009-10-08 23:48:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kakicoco

铁虫 (小有名气)


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-9 10:43
你的片段有没有先克隆到T载体上??如果从T载上来的话,可能顺序反了
7楼2009-10-08 23:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)

TA克隆应该会好点
8楼2009-10-09 03:52:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)


shysh7952(金币+1,VIP+0): 10-9 10:43
保护碱基
9楼2009-10-09 08:28:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shysh7952

铜虫 (初入文坛)

谢谢大家!还有别的原因吗?
10楼2009-10-09 10:46:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shysh7952 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 7/350 2026-05-24 10:20 by 光伏爱好者
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 7/350 2026-05-23 16:57 by articlefan
[基金申请] 揭秘青基评审内幕:几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[论文投稿] 投稿求助,期刊 +4 希冀,有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀,有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
请填处理意见